1 토양균 streaking(예비)

소개글

1 토양균 streaking(예비)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Subject
2. Object
3. Theory & Principle
4.Apparatus & Reagents
5. Procedure
6. Reference books

본문내용

는 다른 성질로 변할 가능성이 있다는 것을 염두에 두어야 한다.
접종
백금선의 끝을 버너의 불꽃 속에서 직접 작열시켜 화염 멸균 시키고 냉각시킨 후 이것을 사용하여 무균 조건하에서 종균을 소량 취하여 새로운 배지에 접종한다. 이 때 공기 중 화염 가까이에서 신속하게 조작하는 방법과 역성비누나 승홍수(0.1%) 등으로 무균상자 속을 분무하여 무균적으로 한 후 그 속에서 조작하는 방법 등이 있다. 후자는 포자가 나르기 쉬운 곰팡이 등의 접종에 주로 사용하는 방법이다. 자외선 램프 등으로 항시 살균시켜 두는 무균실 속에서 이들 조작을 행하면 무균조건을 유지하는 것이 보다 용이하다.
접종 균액의 희석
(가) 솜 마개를 한 시험관에 생리식염수를 9 ml씩 넣고 가압증기로 살균한 다음 냉각 한다.
(나) 시험관에 매직으로 차례로 1번 붙어 7번까지 번호를 붙인다.
(다) 실험대를 깨끗한 물걸레로 닦고 70% 알코올로 닦는다. 그리고 버너에 불을 붙인다.
(라) 시료 또는 토양을 잘 섞고, 그중에서 0.5g을 달아 1번의 생리식염수 시험관에 넣고 잘 혼합시킨다.
(마) 피펫을 싼 알루미늄 호일을 벗기과 1 ml를 취하여 2번 시험관에 넣고 잘 섞는다.
(사) 2번 시험관이 있는 혼합액 1 ml을 취하여 3번 시험관에 넣고 잘 섞는다.
(아) 이러한 조작을 5버너 시험관까지 되풀이하여, 각각 1/10로 희석한 액을 만든다.
(자) 이러한 조작은 무균조작법으로 한다.
분주액량
1ml 1ml 1ml 1ml
토양1g → 1번 시험관 → 2번 시험관 → 3번 시험관 → 4번 시험관 → 5번 시험관
생리식염수 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml
희석배율 1/10 1/100 1/1,000 1/10,000 1/100,000
오계현, 강형일, 소재성 외 2명(2005년), 최신 미생물 실험, 신광문화사, p.68
평판법
희석 도말 평판법: 시료의 선택된 희석물의 0.1ml 분별 액을 멸균된 유리봉을 이용하여 고체 한 처의 윗부분에 균일하게 도말한다. 한천의 표면에서 집락을 생성하고, 형태에 근거하여 다른 미생물을 쉽게 식별할 수 있도록 하는 장점이 있다. 또한 나아가 집락의 분리를 용이하게 한다. 일반적으로 주입평판법 보다 더 많은 세균 계수를 얻을 수 있게 되는 데 아마도 이 방법으로 통기성을 증진시키고 세균의 덩어리를 분산시키기 때문이다.
희석 주입 평판법: 적절한 시료 희석 액의 1ml 분별 액을 페트리접시 내에서 녹인 한천 과 혼합하여 굳힌다. 세균은 집락형성 단위라고 하는 육안으로 보이는 분리된 집락으로 증식되도록 한다. 각 집락형성 단위가 단일 세균세포에 기원하기 때문에 평판 접종 이전의 희석단계에서 생물체들이 개별적인 복제 단위로 분리되는 것이 중요하다. 그러나 실제로, 집락은 세균의 사슬이나 덩어리로부터 생겨날 수 있으므로 진정한 세균수의 과소평가를 가져올 수 있다. 관심 있는 세균의 총수는 특정한 희석에서 발견되는 집락의 수로부터 계산된다.
환경시료로부터 미생물을 분리하는 방법은 흔히 도말 또는 주입평판법 에서 생긴 각 집락의 분리를 필요로 하며 그들의 특성 규명 또는 확인을 가능하게 한다. 이 기법에서 살균된 접종이는 원래의 한천 평판으로부터 집락을 취하는데 사용되며 한 접종이의 세균은 새로운 한천 평판에 획선을 그어 희석한다.
4.Apparatus & Reagents
: dH2O(3차), petri dish, micro pipette, 백금이, alcohol lamp, 토양샘플, clean bench
Nutrient agar 배지 (세균), Czapek-Dox agar 배지 (곰팡이)
- Nutrient agar 배지 (세균)
beef extract 3g, peptone 5g, agar 15g (g/L)
- Czapek-Dox agar 배지 (곰팡이)
NaNO3 3g, K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4·7H2O 0.1g
Glucose 30g, agar 15g (g/L)
정동효(1989년), 미생물실험 매뉴얼, 대광서림, p.72
주의사항
(1) 실험 시 다른 미생물에 의한 오염을 철저하게 방지 하여야 한다.
(2) 사용하는 실험기구, 배지 등은 완전히 멸균 시킨 후 사용하고, 균의 접종, 배양 등 모든 조작은 목적으로 하는 균 외에는 완전히 제거하여야 한다.(무균 조작)
(3) 병원균은 물론, 비병원균에 있어서도 실험 중에 잡균 혼입의 기회를 줄이기 위해 실험 종료 후 미생물 배지 등은 살균하여 버려야 한다.
(4) 화학실험 상의 일반 주의사항을 지킴과 아울러 미생물을 다루는 실험인 만큼 실험실의 청결이나 실험기구의 관리에 보다 깊은 주의를 해야 할 필요가 있다.
5. Procedure
(1) 토양 미생물의 배양
① 유기물이 풍부한 토양을 채취한다. (Cornical Tube 50ml에 약 10ml 정도)
② Cornical Tube에 dH2O(3차)를 약 30ml 넣고 잘 흔들어준다.
③ 감압플라스크로 필터를 해준다.
④ 필터된 물층을 샘플로 보관한다.
⑤ 토양샘플을 이용하여 1/10, 1/100 (1㎖)로 희석하여 Nutrient agar배지와
Czapek-Dox agar 배지에 도말한다. (streaking & spreading)
⑥ Nutrient agar배지는 37℃, Czapek-Dox agar 배지는 25℃ Incubator에 배양한다.
(2) 토양 미생물의 Streaking 방법
① 백금이를 Alcohol lamp에 멸균시킨 뒤, 토양샘플에 백금이를 묻힌다.
② 각각의 균을 배지에 Streaking을 한다.
③ Nutrient agar배지는 37℃, Czapek-Dox agar 배지는 25℃ Incubator에 배양한다.
ibid.
6. Reference books
이상섭, 이광호, 송기준 외 7명(2007년), e-미생물 실험서, 1, 23~26
Brock(1992년), 미생물의 생물학, 범한서적
유주현(2007년), 미생물학실험(응용), 효일
김창한(2000년), 일반미생물학, 유한
오계현, 강형일, 소재성 외 2명(2005년), 최신 미생물 실험, 신광문화사
정동효(1989년), 미생물실험 매뉴얼, 대광서림

키워드

미생물의약품,   토양균,   세균,   진균,   조류