Gene Cloning 실험보고서

소개글

Gene Cloning 실험보고서에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Introduction
2. Materials & Method
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

arose gel을 이용한 방법으로 실험하였다.
Agarose gel은 해상도는 낮지만, DNA 단편을 200 bp에서부터 50 kb까지 분리할 수 있으며 사용이 간편하고, 다루기가 쉽기 때문에 현재 가장 많이 사용되고 있는 전기영동이다. Agarose는 해초로부터 추출되는 물질로서 선형 중합체의 형태를 하고 있다. Agarose gel은 적당한 완충용액(buffer)에 녹여서 원하는 크기의 틀에 부어지며, 젤이 굳은 후에 사용된다. 젤이 굳는 동안 Agarose는 지지체(matrix) 형태가 되며, 그 밀도는 Agarose의 농도(%)에 따라 정해진다. 이러한 젤에 전기장이 주어지면, 음전하를 띠는 DNA는 양극으로 이동한다. 이때 DNA가 이동하는 정도는 여러가지 요인의 영향을 받는다. 기본적으로 분자량이 커질수록 늦어지며 젤의 밀도가 클수록 늦어진다. 또한 DNA의 분자량이 같더라도 구조에 따라서 움직이는 속도가 다르다. 예를 들면 supercoiled DNA가 일반적으로 가장 빠르게 이동하고 그 다음이 linear DNA, open circular DNA 순으로 빠르게 이동한다. 이외에도 부하되는 전압과 전기장의 방향, 전기영동 완충용액의 성분과 이온의 강도도 이동속도에 영향을 준다. Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15%정도 감소시키기도 한다.
본 실험에서는 제한효소를 처리하지 않았기 때문에 대부분이 open circular form이나 supercoiled form으로 나와야 하는게 맞다. 먼저 전기영동의 결과 [사진 4]와 같이 2개의 band가 보임을 알 수 있는데 supercoiled form은 표면적이 open circular form보다 낮아 open circular form보다 아래쪽에 band가 나타난다. 즉 위쪽에 흐릿하게 보이는 band는 open circular form이고 그 밑에 명확하게 보이는 band는 supercoiled form임을 알 수 있다.
또한 실험에서 사용된 재조합DNA (pCMV sport6-(XhoI)STING(EcoRI))는 우선 pCMV sport6은 4177bp이고 제한효소로 절단한 XhoI-EcoRI는 35bp, 삽입한 유전자인 STING 유전자는 1137bp이므로 재조합DNA의 크기는 4177-35+1137=5279bp이다. supercoiled form의 위치는 DNA marker와 비교해보았을 때 3000~4000bp임을 알 수 있는데 supercoiled form은 원래의 길이보다 표면적이 더 낮아 조금 더 낮은 bp에서 뜨기 때문에 본 실험에서 전기영동한 DNA는 성공적으로 재조합이 된 DNA임을 유추할 수 있다.
5. Reference
Reference 1 :
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5144767&cid=61232&categoryId=61232
Reference 2 : http://www.incodom.kr/%EB%B2%A1%ED%84%B0
Reference 3 :
https://ko.wikipedia.org/wiki/%ED%81%B4%EB%A1%9C%EB%8B%9D_%EB%B2%A1 %ED%84%B0
Reference 4 :
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5144744&cid=61232&categoryId=61232
Reference 5 :
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1174460&cid=40942&categoryId=32315
Reference 6 :
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1163380&cid=40942&categoryId=32326
Reference 7 :
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/sub/catalog.php?CatNo=13&gene=18
Reference 8 : https://diane-be-unique.com/2014/06/17/lab-10-mini-prep/
Reference 9 : http://blog.naver.com/chs831/220541011406
Reference 10 :
https://namu.wiki/w/%EC%A0%84%EA%B8%B0%EC%98%81%EB%8F%99
Reference 11 : http://blog.daum.net/soar7007/7965306
Reference 12 :
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=j1076&logNo=220187921226&parentCategoryNo=&categoryNo=1&viewDate=&isShowPopularPosts=true&from=search
Reference 13 : https://blog.naver.com/withcoffee67/70158243055
그림 1 : http://pocafiamma.tistory.com/1612
그림 2 :
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=ling1134&logNo=70176009059&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.co.kr%2F
그림 3 :
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=wldmsqkqn1&logNo=150100608787&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.co.kr%2F
그림 4 : http://biochemistry.yonsei.ac.kr/sub/catalog.php?CatNo=13&gene=18
그림 5 :
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/sub/catalog.php?CatNo=13&gene=20&PHPSESSID=949872877c3358c37a21e0a24ee85719
그림 6 :
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=j1076&logNo=220617005096&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.co.kr%2F

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미생물학,   유전자,   클로닝,   gene,   cloning,   실험보고서,   유전학,   생명과학,   생물