[만점레포트] qPCR 결과 분석 방법_염증성 사이토카인 발현 확인

소개글

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목차

Ⅰ. Introduction
1. Real time PCR (qPCR)
-정의
-원리
-사용되는 형광물질의 종류
2. innate immune response (선천성 면역반응)
3. cDNA
-cDNA를 합성하는 이유: RNA를 cDNA로 합성하는 이유, genomic DNA를 사용하지 않고 cDNA를 합성하여 사용하는 이유
4. TriZol을 이용한 RNA 추출
-RNA 추출 원리
-장점
-단점

II. Materials and Methods
1.실험도구
2.각 실험도구의 기능
-chloroform의 기능
-isopropanol의 기능
-DEPC water의 기능
-nuclease free water
3. 실험과정

III. Results
BMDM sample로 분석했을때, 실험 결과 및 분석 방법

IV. Discussion

본문내용

Ⅰ. Introduction
1. Real time PCR
quantitative polymerase chain reaction(qPCR)이라고도 하며, DNA를 amplify함과 동시에, sample에 있는 DNA 양을 quantify하기 위한 실험 기법이다. 전통적인 PCR과 달리, PCR을 진행하는 동안에 target DNA molecule이 amplification되는 것을 매 cycle마다 실시간으로 확인할 수 있다.
–원리: qPCR 진행 시 새로 합성된 strand는 fluorophore(형광물질)을 나타내게 되는데, qPCR 기기는 내부에서 빛을 쏴서, sample에 있는 fluorophore을 detect한 값을 컴퓨터로 나타낸다. 따라서 qPCR을 돌린 지 n번째 cycle이 되면 형광값(=strand의 개수)이 급격하게 증가하는데, 이때 특정 threshold값에 도달하는 시점을 계산한다. 증폭된 DNA양은 결국 처음 sample에 있던 DNA의 양을 반영하는 것이므로, threshold에 도달한 시점을 통해 처음 sample에 있던 DNA의 양을 알 수 있다. qPCR로 핵산의 양을 quantify하는 방법으로는 크게 두 가지가 있다.

키워드

염증성 사이토카인,   사이토카인,   real time PCR,   quantitative PCR,   선천성 면역,   cDNA,   Trizol,   innate immune response,   qPCR