목차
1 단백질 분자의 크기
2 Polypeptide 사슬의 구조
3 단백질의 결합부위
4 소단위를 갖는 단백질
5 단백질 구조의 연구방법
6 복합단백질: 면역 globulin G
7 효소
8 효소활성의 측정
9 방사능 단백질의 제조
2 Polypeptide 사슬의 구조
3 단백질의 결합부위
4 소단위를 갖는 단백질
5 단백질 구조의 연구방법
6 복합단백질: 면역 globulin G
7 효소
8 효소활성의 측정
9 방사능 단백질의 제조
본문내용
반응을 촉진시킴
활성화된 ES complex: (ES)*
ES가 형성되는 정도는 E와 S 사이의 결합강도에 의해 결정됨: 친화성 (affinity)
ㅡMichaelis constant (Km)에 의해 친화성을 측정
Km: 효소의 반응속도가 최대의 1/2이 되는 기질분자와 결합한 활성부위를 갖게 될 때의 농도
6.7.2 효소-기질 복합체 형성의 메커니즘
효소반응단계: 기질과의 결합 → 산물로의 전환 → 산물의 방출
효소-기질 결합의 메커니즘
자물쇠-열쇠 (lock-and ?key)
효소의 활성부위의 모양은 기질의 모양과 상보적임
유도적합 (induced fit)
활성부위는 기질이 결합한 후에야 모양이 변해 기질과 상보적인 형태가 됨
6.7.3 효소-기질 복합체의 분자적 기초
Lysozyme: 활성부위 19개의 아미노산으로 구성
3차원적 공간에서 활성부위가 모인 후 기질이 결합할 때 효소의 모양이 변함
(공간채움모형, space-filling model)
6.7.4 효소-기질 복합체의 해리: 전환 (turnover)
ES complex로부터 생성물이 생성되는 속도는 복합체 형성과 생성물의 해리 사이의
평균 경과시간에 따라 달라질 수 있음
전환수 (turnover number): 1초에 하나의 효소분자가 생성물로 전환시킬 수 있는 기질분자의 수
E + S ⇔ ES ⇔ (ES)* → E + P
6.8 효소활성의 측정
광학적 분석
방사능 분석
6.8.1 효소활성의 광학적 분석
반응 혼합액의 몇 가지 성분이 특정한 파장의 빛을 흡수하는 능력을 측정
흡수도 A와 농도는 비례관계임
세포내 자외선 흡수물질: 핵산의 염기, Trp, Tyr, His, Phe, 보조인자, 비타민
o-nitrophenyl galactoside (ONPG): β-galactosidase 분석에 사용
β-galactosidase
ONPG ───────→ galactose + o-nitrophenol (짙은 노란색)
효소활성은 420 nm 의 파장에서 ONPG의 농도를 측정함으로써 측정
6.8.2 효소의 방사능 분석
방사능이 있는 반응물을 반응혼합액에 넣어 다른 방사능 물질이 생성되거나 방사능
반응물이 감소되는 것을 측정
19개의 비방사능 아미노산과 적당한 효소와 인자들은 포함한 반응액에 방사능 아미노산
(14C) 을 첨가하여 단백질 합성도를 측정
↓
일정시간 후 TCA를 첨가하고 혼합액을 여과하고 TCA로 세척함
↓
14C 표지 아미노산은 용해성이므로 여과지를 통과하고 14C 단백질은 침전되어 여과지에 남음
↓
여과지에 결합된 방사능을 측정하여 반응의 정도를 측정함
6.9 방사능 단백질의 제조
미생물 유래의 단백질: 증식배지에 방사능 단백질 전구물질을 첨가하여 표지함
표지를 위한 아미노산의 선택
glycin: 일반적인 탄소원으로 이용될 수 있으므로 불가
aspartic acid: purine 생합성 결로에 있으므로 핵산에서 나타날 수 있어 불가
leucine, phenylalam\nine: 3H, 14C으로 표지하여 사용가능
Met, Cys: 35S로 표지하여 사용 가능
활성화된 ES complex: (ES)*
ES가 형성되는 정도는 E와 S 사이의 결합강도에 의해 결정됨: 친화성 (affinity)
ㅡMichaelis constant (Km)에 의해 친화성을 측정
Km: 효소의 반응속도가 최대의 1/2이 되는 기질분자와 결합한 활성부위를 갖게 될 때의 농도
6.7.2 효소-기질 복합체 형성의 메커니즘
효소반응단계: 기질과의 결합 → 산물로의 전환 → 산물의 방출
효소-기질 결합의 메커니즘
자물쇠-열쇠 (lock-and ?key)
효소의 활성부위의 모양은 기질의 모양과 상보적임
유도적합 (induced fit)
활성부위는 기질이 결합한 후에야 모양이 변해 기질과 상보적인 형태가 됨
6.7.3 효소-기질 복합체의 분자적 기초
Lysozyme: 활성부위 19개의 아미노산으로 구성
3차원적 공간에서 활성부위가 모인 후 기질이 결합할 때 효소의 모양이 변함
(공간채움모형, space-filling model)
6.7.4 효소-기질 복합체의 해리: 전환 (turnover)
ES complex로부터 생성물이 생성되는 속도는 복합체 형성과 생성물의 해리 사이의
평균 경과시간에 따라 달라질 수 있음
전환수 (turnover number): 1초에 하나의 효소분자가 생성물로 전환시킬 수 있는 기질분자의 수
E + S ⇔ ES ⇔ (ES)* → E + P
6.8 효소활성의 측정
광학적 분석
방사능 분석
6.8.1 효소활성의 광학적 분석
반응 혼합액의 몇 가지 성분이 특정한 파장의 빛을 흡수하는 능력을 측정
흡수도 A와 농도는 비례관계임
세포내 자외선 흡수물질: 핵산의 염기, Trp, Tyr, His, Phe, 보조인자, 비타민
o-nitrophenyl galactoside (ONPG): β-galactosidase 분석에 사용
β-galactosidase
ONPG ───────→ galactose + o-nitrophenol (짙은 노란색)
효소활성은 420 nm 의 파장에서 ONPG의 농도를 측정함으로써 측정
6.8.2 효소의 방사능 분석
방사능이 있는 반응물을 반응혼합액에 넣어 다른 방사능 물질이 생성되거나 방사능
반응물이 감소되는 것을 측정
19개의 비방사능 아미노산과 적당한 효소와 인자들은 포함한 반응액에 방사능 아미노산
(14C) 을 첨가하여 단백질 합성도를 측정
↓
일정시간 후 TCA를 첨가하고 혼합액을 여과하고 TCA로 세척함
↓
14C 표지 아미노산은 용해성이므로 여과지를 통과하고 14C 단백질은 침전되어 여과지에 남음
↓
여과지에 결합된 방사능을 측정하여 반응의 정도를 측정함
6.9 방사능 단백질의 제조
미생물 유래의 단백질: 증식배지에 방사능 단백질 전구물질을 첨가하여 표지함
표지를 위한 아미노산의 선택
glycin: 일반적인 탄소원으로 이용될 수 있으므로 불가
aspartic acid: purine 생합성 결로에 있으므로 핵산에서 나타날 수 있어 불가
leucine, phenylalam\nine: 3H, 14C으로 표지하여 사용가능
Met, Cys: 35S로 표지하여 사용 가능