목차
1. Title: 직접계수법(MPN법)
1. Title: 박막여과법을 이용한 미생물계수법
1. Title: 직접계수법(도말평판법과 주가평판법)
1. Title:순수배양 (Endo-LES배지에 접종, NA배지에 접종)
1. Title: Gram Stain
1. Title:생화학적 테스트
1. Title:직접계수법(DAPI염색 법)
1. Title: β-glucosidase activity
1. Title: 박막여과법을 이용한 미생물계수법
1. Title: 직접계수법(도말평판법과 주가평판법)
1. Title:순수배양 (Endo-LES배지에 접종, NA배지에 접종)
1. Title: Gram Stain
1. Title:생화학적 테스트
1. Title:직접계수법(DAPI염색 법)
1. Title: β-glucosidase activity
본문내용
양을 계산했다.
10mM--->100μM(만들어 놓은 용액) [mv=m'v']
2.5μM--->112.5㎕
25μM--->1125㎕
50μM--->2250㎕
100μM--->4500㎕
6. Experimental procedures:
1. 문천지에서 문천지물을 하루전에 채취하여 유리병에 넣어두었다.
2. 4개의 tube에 시료(문천지물)를 pipette을 사용하여 4.5㎖씩 넣고 멸균시켰다.
3. 멸균 후에 MUF를 아래의 표와 같은 양을 첨가 시켰다.
*표1.기질의 농도와 첨가량
최종농도
문천지물
Stock Solution(10mM)=MUF
2.5μM
4.5㎖
112.5㎕
25μM
4.5㎖
1125㎕
50μM
4.5㎖
2250㎕
250μM
4.5㎖
4500㎕
4. 현장 온도에서 2시간 배양했다.
5. 배양이 끝난후 형광광도계로 정량분석했다.
6. Lineweaver-Bark식을 이용하여 Vmax와 Kt+Sn값을 구했다.
7. Result:
*표2.형광광도계에 의한 결과
대조구
1
2
3
세균수/3-대조구
2.5
602
923
823
847
262.33
25
588
1184
1066
1114
533.33
50
560
1138
1170
1132
586.67
100
541
1132
1082
1076
554
*표3.Lineweaver-Bark식을 이용하여 Vmax와 Kt+Sn값
μM
nM
activing
2.5
2500
26.23
190.62
(26.23:2=2500:x)
25
25000
53.33
937.56
(53.33:2=25000:x)
50
50000
58.67
1704.45
(58.67:2=50000:x)
*표4.Lineweaver-Bark식에 대입하기 위해서 아래와 같이 계산하였다
X(1/S)
X2
Y(1/V)
Y2
XY
1/2500(0.0004)
0.00000016
190.62/2500(0.076248)
0.005814
3.04992E-05
1/25000(0.00004)
1.6E-09
937.56/25000(0.0375024)
0.001406
1.5001E-06
1/50000(0.00002)
4E-10
1704.45/50000(0.034089)
0.001162
6.8178E-07
합계
0.00046
0.000000162
0.1478394
0.008385
0.0000328
*Lineweaver-Bark식
V=Vmax[S]/(Km+[S])
y=ax+b <=> 1/V=(Vmax/Km)*(1/[S])+1/Vmax
a=n∑XY-∑X∑Y/n∑X2-(∑X)2
=(3X0.0000328)-(0.00046X0.1478394)/(3X0.000000162)-(0.00046)2
=111.9892
b=∑X2∑Y-∑X∑XY/n∑X2-(∑X)2
=(0.000000161X0.1478394)-(0.00046X0.0000328)/(3X0.000000162)-0.00046)2
=0.32108
y=111.9892x+0.32108<==>1/V=(Vmax/Km)*(1/[S])+1/Vmax
*Vmax값
1/Vmax=0.32108 ==>> Vmax=1/0.32108=3.114(nM/hr)
*Km값
a=Vmax/Km ==>> Km=Vmax/a
Km=3.114/1119892=0.278nM
8. Discussion:
*표1.기질의 농도와 첨가량
형광물질 붙인 기질(MUF)을 첨가하였는데, 기질은 미생물과 결합을 한다.
이 때 형광물질 붙인 기질(MUF)을 첨가한 이유는 미생물이 많을수록 기질과의 결합이 많을 것이다. 다시 말해 기질분해를 위해 효소가 분해가 된다. 즉, 미생물이 형광물질 붙인 기질(MUF)과 반응하여 형광물질 붙인 기질(MUF)의 효소가 분해됨에 따라 이 형광물질의 양의 흡광도를 측정하여 세균의 활성도를 측정할수 있었다.
*표2.형광광도계에 의한 결과
기질과 미생물이 충분히 반응할 수 있도록 배양한 후 spectrophotometer를 이용하여 흡광도를 측정한 결과이다.
위의 그래프에서 보면 미생물과 기질과의 반응이 저 농도에서 고농도로 감에 따라서
미생물과 기질의 결합이 25μM에서 가장 활발했으며, 곡선을 봤을 때 반응이 처음에는 활발했다가 어느선에서는 일정해지는 것을 알 수 있다. 즉, 미생물은 자신이 살아가는데 적절한 환경이 있음을 말해준다.
*Lineweaver-Bark식을 이용
Vm값을 구할수 있었는데, 결과를 보면 Vm값이 3.114(nM/hr)였다. 즉, 3.114의 속도로 세균 분해를 한 것이다. Vm은 분해속도 로서 Vm이 높다는 것은 오염도가 높다는 것이고 세균을 활성도가 높다는 말이다.
*spectrophotometer
cell의 윗부분에 한쪽방향에 홈이 파인 부분을 잡지 않도록 주의하고 두 면만이 불투명하게 조각이 나있다. spectrophotometer의 이 부분을 잡도록하며 시료를 8부이상 채우도록 주의한다.
*Lineweaver-Bark식
@단순효소촉매의 반응속도론
1) E +S --K1--a ES -K2---a E + P aK-1--- a- K-2: (p의 양이 거의 없으므로 무시)
2) 정상 상태에서는 ES 생성 속도와 ES분해속도가 같다.
3) (효소 반응속도: 기질소모속도, 생성물 생성속도) V=K2[ES]
4) Vm= 최대 반응속도, 효소량에 의해 변화하나 기질과는 무관하다. V0=초기속도
5) Km=k-1 + k2/k1 = Vm의 1/2 (michaelis menten 상수, 효소와 기질 친화도( 값이 적을수록 친화도가 높다.)
6) [ES]=[E0][S]/[S] + Km
7) [ES]=[E0] 일 때 최대 속도가 얻어진다.
8) V0= K2 [ES]
9) Vmax= k2 [E0]
10) 1/v= 1/Vm + km/Vm(1/[s])---------Lineweaver-Bark plotting(Vm 정확하나, km은 부정확하다.)
@ Km
1) [s]가 아주 클 때는 의미가 없다.
2) 속도 재한 단계를 예측하는데 사용할 수 있다.
A. Km 값에 변화를 주는 요인들
a. Ph
b. 온도
c. 이온의 세기
9. Reference:
http://blog.naver.com/kmsonic.do?Redirect=Log&logNo=20003846376
10mM--->100μM(만들어 놓은 용액) [mv=m'v']
2.5μM--->112.5㎕
25μM--->1125㎕
50μM--->2250㎕
100μM--->4500㎕
6. Experimental procedures:
1. 문천지에서 문천지물을 하루전에 채취하여 유리병에 넣어두었다.
2. 4개의 tube에 시료(문천지물)를 pipette을 사용하여 4.5㎖씩 넣고 멸균시켰다.
3. 멸균 후에 MUF를 아래의 표와 같은 양을 첨가 시켰다.
*표1.기질의 농도와 첨가량
최종농도
문천지물
Stock Solution(10mM)=MUF
2.5μM
4.5㎖
112.5㎕
25μM
4.5㎖
1125㎕
50μM
4.5㎖
2250㎕
250μM
4.5㎖
4500㎕
4. 현장 온도에서 2시간 배양했다.
5. 배양이 끝난후 형광광도계로 정량분석했다.
6. Lineweaver-Bark식을 이용하여 Vmax와 Kt+Sn값을 구했다.
7. Result:
*표2.형광광도계에 의한 결과
대조구
1
2
3
세균수/3-대조구
2.5
602
923
823
847
262.33
25
588
1184
1066
1114
533.33
50
560
1138
1170
1132
586.67
100
541
1132
1082
1076
554
*표3.Lineweaver-Bark식을 이용하여 Vmax와 Kt+Sn값
μM
nM
activing
2.5
2500
26.23
190.62
(26.23:2=2500:x)
25
25000
53.33
937.56
(53.33:2=25000:x)
50
50000
58.67
1704.45
(58.67:2=50000:x)
*표4.Lineweaver-Bark식에 대입하기 위해서 아래와 같이 계산하였다
X(1/S)
X2
Y(1/V)
Y2
XY
1/2500(0.0004)
0.00000016
190.62/2500(0.076248)
0.005814
3.04992E-05
1/25000(0.00004)
1.6E-09
937.56/25000(0.0375024)
0.001406
1.5001E-06
1/50000(0.00002)
4E-10
1704.45/50000(0.034089)
0.001162
6.8178E-07
합계
0.00046
0.000000162
0.1478394
0.008385
0.0000328
*Lineweaver-Bark식
V=Vmax[S]/(Km+[S])
y=ax+b <=> 1/V=(Vmax/Km)*(1/[S])+1/Vmax
a=n∑XY-∑X∑Y/n∑X2-(∑X)2
=(3X0.0000328)-(0.00046X0.1478394)/(3X0.000000162)-(0.00046)2
=111.9892
b=∑X2∑Y-∑X∑XY/n∑X2-(∑X)2
=(0.000000161X0.1478394)-(0.00046X0.0000328)/(3X0.000000162)-0.00046)2
=0.32108
y=111.9892x+0.32108<==>1/V=(Vmax/Km)*(1/[S])+1/Vmax
*Vmax값
1/Vmax=0.32108 ==>> Vmax=1/0.32108=3.114(nM/hr)
*Km값
a=Vmax/Km ==>> Km=Vmax/a
Km=3.114/1119892=0.278nM
8. Discussion:
*표1.기질의 농도와 첨가량
형광물질 붙인 기질(MUF)을 첨가하였는데, 기질은 미생물과 결합을 한다.
이 때 형광물질 붙인 기질(MUF)을 첨가한 이유는 미생물이 많을수록 기질과의 결합이 많을 것이다. 다시 말해 기질분해를 위해 효소가 분해가 된다. 즉, 미생물이 형광물질 붙인 기질(MUF)과 반응하여 형광물질 붙인 기질(MUF)의 효소가 분해됨에 따라 이 형광물질의 양의 흡광도를 측정하여 세균의 활성도를 측정할수 있었다.
*표2.형광광도계에 의한 결과
기질과 미생물이 충분히 반응할 수 있도록 배양한 후 spectrophotometer를 이용하여 흡광도를 측정한 결과이다.
위의 그래프에서 보면 미생물과 기질과의 반응이 저 농도에서 고농도로 감에 따라서
미생물과 기질의 결합이 25μM에서 가장 활발했으며, 곡선을 봤을 때 반응이 처음에는 활발했다가 어느선에서는 일정해지는 것을 알 수 있다. 즉, 미생물은 자신이 살아가는데 적절한 환경이 있음을 말해준다.
*Lineweaver-Bark식을 이용
Vm값을 구할수 있었는데, 결과를 보면 Vm값이 3.114(nM/hr)였다. 즉, 3.114의 속도로 세균 분해를 한 것이다. Vm은 분해속도 로서 Vm이 높다는 것은 오염도가 높다는 것이고 세균을 활성도가 높다는 말이다.
*spectrophotometer
cell의 윗부분에 한쪽방향에 홈이 파인 부분을 잡지 않도록 주의하고 두 면만이 불투명하게 조각이 나있다. spectrophotometer의 이 부분을 잡도록하며 시료를 8부이상 채우도록 주의한다.
*Lineweaver-Bark식
@단순효소촉매의 반응속도론
1) E +S --K1--a ES -K2---a E + P aK-1--- a- K-2: (p의 양이 거의 없으므로 무시)
2) 정상 상태에서는 ES 생성 속도와 ES분해속도가 같다.
3) (효소 반응속도: 기질소모속도, 생성물 생성속도) V=K2[ES]
4) Vm= 최대 반응속도, 효소량에 의해 변화하나 기질과는 무관하다. V0=초기속도
5) Km=k-1 + k2/k1 = Vm의 1/2 (michaelis menten 상수, 효소와 기질 친화도( 값이 적을수록 친화도가 높다.)
6) [ES]=[E0][S]/[S] + Km
7) [ES]=[E0] 일 때 최대 속도가 얻어진다.
8) V0= K2 [ES]
9) Vmax= k2 [E0]
10) 1/v= 1/Vm + km/Vm(1/[s])---------Lineweaver-Bark plotting(Vm 정확하나, km은 부정확하다.)
@ Km
1) [s]가 아주 클 때는 의미가 없다.
2) 속도 재한 단계를 예측하는데 사용할 수 있다.
A. Km 값에 변화를 주는 요인들
a. Ph
b. 온도
c. 이온의 세기
9. Reference:
http://blog.naver.com/kmsonic.do?Redirect=Log&logNo=20003846376
키워드
추천자료
- 그람염색에 대하여
- 세균 세포벽의 화학물질에 대하여 쓰시오.
- 감염 예방과 통제
- 인간과 미생물 - 토착미생물에 대하여
- 일반생물학실험-세균의 형태관찰 및 그람염색법
- Lumbar Puncture (요추천자)
- 세포의 구조, 원핵생물과 진핵생물 (구균,간균 등), 미생물의 관찰(현미경), 미생물염색
- 생물막(Biofilm) 구강 미생물 구강생태계 치태
- 원핵생물의 구조와 기능
- 세포벽의 구성성분과 그람양성, 음성균의 세포벽 조성 차이
- 미생물의 정의 및 발견 현태와 분류
- 1018_염색1
- [생화학]생명의 기본단위와 생화학 반응의 환경 (생명체의 특징과 생화학, 세포, 생체 분자를...
- 스트렙토마이시스
소개글