동물 세포 배양

목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론

4. 시약 및 장비

5. 실험 방법

6. 참고문헌

본문내용

라붙는 것을 말한다.
다세포동물에서는 그 기본적 속성으로, 세포와 세포가 세포막을 사이에 두고 서로 달라붙 어 있고(세포간접부착, cell-cell adhesion), 특별한 실험적 처리를 하지 않는 한 개개의 세포는 해리하지 않는다.
동물세포는 그 외에 세포외기질이라고 불리는 비세포성의 분자복합체에 접착하고 있으며 (세포-기질접착, cell-substrate adhesion), 배양계에서는 단백질 등이 흡착된 유리나 플 라스틱 등의 표면에 부착한.
대부분의 조직세포는 이 두 가지의 접착양식을 동시에 보이지만, 세포의 종에 따라서는 한쪽의 양식만을 취하는 것도 있다. 예를 들며, 매크로파아지 등 백혈구의 어떤 것은 서로 강하게 집합하는 일은 없지만 배양접시 등에는 강하게 접착한다. 반대로, 어떤 종 의 암세포는, 서로 잘 접착하지만 배양접시에는 접착할 수 없는 것이 있다.
세포의 접착은 세포접착수용체의 작용에 의해서 일어나고, 세포의 종류에 따른 접착성의 차이는 발현하는 수용체의 차이에 의존한다. 단지, 인공적 물질에 대해서는 특정의 수용 체에 의존하지 않는 접착도 일어난다. 예를 들면, 단백질이 존재하지 않는 배양액 속에서 는 세포는 유리나 플라스틱표면에 비가역적, 비특이적으로 접착한다. 또한 세포는 그 표 면상의 음전하에 의해 폴리카티온(폴리리딘 등)으로 코팅된 배양접시에 강고하게 접착한 다. 이 현상은 신경세포를 충분히 신전시키기 위해서 이용되고 있다.
한편, 세포는 한천 등에서는 접착하기 어려운 성질을 갖고, 한천내배양은 세포증식에 있 어서의 기반의존성(→세포신전)을 판정하기 위해서 사용된다. 세포의 접착, 접촉을 매개로 하여 여러 가지 정보의 전달, 교환 또는 인식이 이루어지고, 증식, 분화, 운동 등의 제어 를 위해서 중요한 역할을 해내고 있다. 식물에서는 개개의 세포가 세포벽으로 덮여 있어 세포접착의 양식은 동물의 경우와는 근본적으로 다르다.
세포부착분자
세포접의 접착에 관여하는 분자의 총칭. 세포와 세포의 접착, 즉 세포간 접착에 관여하는 분자와 세포와 세포외기질의 접착, 즉 세포-기질접착에 관여하는 분자로 구분된다.
세포부착성 단백질
세포를 접착시키는 단백질의 총칭. 세포-기질접착시 기질 쪽의 단백질, 피브로넥틴, 라미 닌, 비트로넥틴, 콜라겐, 피브리노겐 등이 여기에 속한다.
세포주 (cell line)
세포주란 몇 차례 분열하면 죽는 보통의 세포와 달리 특수 처리해 다른 세포로 분화되지 않고 영원히 분열하도록 만든 세포를 말한다.
다시 말하자면, 1차 배양이나 세포계에서 나온 특수한 성질이나 표지를 가진 것을 곧 선 발하거나 영양계로 한 것이다. (세포계 : 1차 배양에서 계대배양하여 나온 세포들)
일반적으로 동물이나 식물에서 추출해낸 세포는 세대를 거듭 할수록 그 기능이나 활성이 현저하게 줄어드는 경향이 있다. 이러한 단점을 보완하고 실험할 때마다 원하는 세포를 대상 생물에서 추출해 내는 수고를 덜기 위해 만들어낸 것이다.
초기 세포주는 죽지 않고 계속 분열하는 암세포를 기초로 하여 제작되었다고 한다. 이렇 게 제작된 세포들은 여러 세대를 거치는 동안 그 세포 고유의 기능을 그대로 보유하고 있 기 때문에 적은 양을 구입하여 이를 배양해서 많은 양의 세포를 얻을 수 있다.
조골세포 (osteoblast)
뼈의 신생 및 재생에 관여하는 세포. 골질(骨質)을 분비하여 뼈를 만든다.
척추동물의 경골(硬骨)을 만드는 세포로 골아세포(骨芽細胞)라고도 한다. 세포 밖으로 골 질을 분비하고 스스로는 골질에 싸여 골세포로 변한다. 섬유모세포(纖維母細胞:섬유아세 포)에서 분화한 것으로, 분열능력이 크고, 형성과정에 있는 경골의 표층에 한 층으로 배 열되어 수상돌기로 서로 연락하고 있다. 이 세포군의 바깥쪽에는 골막(骨膜)이 있다. 뼈 형성이 끝나도 골막내면에는 조골세포가 존재하지만 노화된 뼈에서는 그 수가 감소한다.
from mesenchyme cells
responsible for bone formation (osteogenesis)
synthesize and export a products (intercellular substance, extracellular substance or bone matrix)
markers for osteoblast
- alkaline phosphatase, prostaglandin E2 (PGE-2), collagenase, collagenase inhibitor, transforming growth factor-b, type I collagen, osteonectin, osteocalcin, osteopontin
4. 시약 및 장비
1) 고정 장비류
무균 실험대 - laminar flow, 적외선 살균등, 점화장치
이산화타소 incubator - 온도, CO2, 습도 조절 가능
도립 현미경, 여과 장치, 진공 펌프, 흡입 장치
2) 시약 및 장비
세포 배양 배양액, 혈청, 항생제, NaHCO3, 배양 접시, Pasteur 피펫, PBS(cell culture grade), 1x Trypsin-EDTA, 75% ethanol, Medium Bottle - autoclave 용, 피펫, Hemacytometer 및 cell counter
5. 실험 방법
1) PBS(phospate buffered saline)와 배양액을 37℃ 항온조에 미리 가열시킨다.
2) 배양액을 모두 흡입제거 하고 PBS 2ml로 워싱 후 PBS를 흡입제거 한다.
3) 1x trypsin-EDTA 용액을 200㎕를 접시에 첨가 한 후 세포가 바닥에서 떨어지도록 흔 들어 준다.
4) 37℃ culture incubator 에 10분간 보관한다.
5) 희석 부피를 맞춰주기 위해서 PBS 800㎕을 첨가한다.
6) 잘 섞은 후 10㎕를 ET에 넣고 trypan blue도 10㎕ 넣어준다. (1:1로 혼합)
7) hemacytometer에 혼합된 용액을 10㎕ 첨가한다.
8) hemacytometer를 이용하여 세포수를 측정한다.
6. 참고문헌
세포배양노트 / 월드사이언스
진단 분자 생물학 / 현문사
생물공학실험서 / 자유아카데미
배양공학 / 유한문화사

키워드

동물세포배양,   혈청,   세포배양배지