배지조제실험보고서

목차

1. 실험상의 주의사항

2. 실험 Report 작성법

3. 주요 실험기구 및 기기 소개
(1) 실험기구
(2) 미생물 실험에 사용되는 주요 기기

4. 미생물 멸균법에 대해서
(1) 멸균 및 살균방법
㉠ 자비소독
㉡ 간헐살균(tyndallization)

5. 미생물배지에 대해
(1) 미생물과 영양원
(2) 배지성분의 성상에 따른 분류
(3) 물리적 성상에 따른 분류
㉠ 평판배지(plate)
㉡ 고층배지(butt)
㉢ 사면배지(slant)

6. 배지조제 실습

본문내용

압증기멸균법
(Autoclaving)
ㆍ고온, 고압에 변질, 분해되지 않는 배지류나 건열 멸균이 곤란한 기구의 멸균
ㆍ15 lbf/in2(121℃)에서 15분
ㆍ일반 배지 살균
ㆍ15lb/in2≒ 1.1kg중/㎠
상압증기멸균법
(간헐멸균법)
ㆍ고온에서 변성을 일으킨 물질을 함유한 배지 등의 멸균
ㆍ1일 1회 100℃, 30분씩 연속 3회
ㆍ코흐(koch)의 증기솥
화학적 살균
ㆍ0.1% 승홍수 용액(손 소독)
ㆍ영양세포는수분내에 사멸
ㆍ금속제, 고무류 소속은 안된다
ㆍ70%알코올 용액 (손 소독)
ㆍ플라스틱 용기, 주사 국소소독, 코르크 마개소독
ㆍ손소독시에는 피부에 흡수되어 지각신경을 마비시킴
ㆍ3%석탄산 수용액(의류,실험대 소독)
ㆍ3%역성비누액(손, 식기, 배양초자기구, 고무 제품)
ㆍ플라스틱 용기
자외선 살균
ㆍ파장 2537A(254nm)의 자외선이 가장 유효
ㆍ무균상자 ( 무균상, kasten,
clean bench)
ㆍ자외선을 직접 바라보면 눈에 결막염
여과제균
ㆍ가열할수 없는 물질을 지닌 용액의
멸균
ㆍmenbrane filter
5. 미생물배지에 대해
미생물이 생장하려면 고등생물과 같이 영양소를 필요로 하는데, 인공적으로 미생물을 생존시키고 지속적으로 증식시키기 위해서 적당량의 영양성분을 혼합한 것을 배지(medium)라 한다.
(1) 미생물과 영양원
미생물의 생장에 필요한 영양소로는 탄소원, 질소원, 생장요소급원, 무기염류 등이 있는데, glucose, lactose, sucrose, peptone, tryptone, yeast extract, meat extract 외에 각종 무기염류와 특수성분들이 이용된다. 그러나 미생물이 요구하는 원소일지라도 그 화합물의 형태는 미생물의 종류에 따라 다르다.
(2) 배지성분의 성상에 따른 분류
자연배지
합성배지
반합성배지
(3) 물리적 성상에 따른 분류
액체 배지 : 미생물을 대량으로 증식시킬 목적으로 사용된다.
고체 배지 : 액체 배지를 고형화한 형태로서 한천 1.5~2%를 첨가하여 만든다. 주로 미생물의 순수분리나 균주 보존을 목적으로 이용된다. → 액체배지+agar
㉠ 평판배지(plate) : 멸균된 배지를 멸균된 페트리접시에 붓고 이를 응고시킨 배지. 순수배양이나 생균수 측정 등의 목적에 사용된다.
㉡ 고층배지(butt) : 고체배지를 시험관에 넣고 수직으로 응고시킨 배지
㉢ 사면배지(slant) : 고체배지를 시험관에 넣고 경사지게 응고시킨 배지
반고체 배지 : 한천이 0.5~1% 사용된 배지로 평판배지 상에 중층을 하거나 박테리아의 운동성을 평가할 때 이용된다.
→ 유동성이 있는 배지
6. 배지조제 실습
(1) 실험제목(Title) : 배지조제 실습
(2) 서론(Introduction)
실험목적(Objectives)
미생물을 배양하고 분리, 동정하기 위해서는 배양하고자 하는 미생물의 종류에 따라 적절한 배지를 선택하여 사용해야한다. 따라서 본 실험의 목적은 배지의 종류와 각종 배지의 제조방법들을 배워서 미생물의 생육조건과 사용목적에 따라 적합한 배지를 선택하는 데 있다.
실험원리(Principle)
미생물의 생장에 필요한 모든 영양성분이 들어있는 혼합물을 배지라고 한다. 배지는 물리적 상태에 따라 고체 배지와 액체배지로 구분한다. 고체배지는 액체배지에 한천, 젤라틴, 실리카겔 등 젤을 형성하는 물질을 첨가하여 제조한다. 젤 형성 물질 중 한천(Agar)이 가장 이상적으로 평가되는데, 한천은 해초에서 추출한 다당류로 대부분의 미생물이 이를 이용하지 못하기 때문이다. 일반적으로 한천을 1.5~2% 정도 넣어서 고화시켜 고체배지를 만든다. 고체배지는 목적에 따라 평판배지, 사면배지, 고층배지로 구분할 수 있다. 이와 같이 배지는 배양하고자 하는 미생물의 종류와 목적에 따라 적합한 것을 선택하여 사용하여야 한다.
(3) 재료 및 방법(Material and Methods)
재료
배지성분 : 증류수, 한천(agar powder)
→ 제조방법만을 알아본 실험이기에 미생물 종류는 첨가하지 않았다.
기구 및 시약 : 미량저울, 삼각플라스크, 메스실린더, petri dish, 알코올램프, hot plate, 방열장갑, 시험관.
방법
㉠ 한천 1.5% (15g/1000ml)로 만들 것이므로 한천 3g에 증류수 200ml를 넣어주기로 미리 계산한다.
㉡ 미량저울의 0점을 tare버튼을 눌러 맞추고, 3g을 정확히 측량한다.
㉢ 한천(agar powder) 3g을 삼각플라스크에 넣고 메스실린더로 증류수 200ml를 측량해 넣어준다.
㉣ 한천(agar powder)과 증류수를 섞어준 플라스크를 hot plate 위에 올려놓고 끓을 때까지 놓아둔다. → 끓여줘야 용해가 잘된다.
㉤ 끓인 한천용액을 petri dish에 반보다 적게 부어준다. → 평판배지
이 때, 알코올 램프를 켜두어 clean zone을 만들어준다.
㉥ 시험관에도 한천용액(agar powder)을 반보다 적게 넣어 시험관대에 꽂아둔다. → 액체배지
㉦ 시험관에 한천용액을 반보다 적게 넣고 적당한 각도를 기울여서 굳힌다. → 사면배지
※ 주의할 점
사면배지는 표면적이 넓기 때문에 쉽게 건조되므로 사용하기 직전에 만드는 것이 바람직하다.
배지의 양이 너무 적으면 보존 중에 말라 버리기 쉽고, 양이 너무 많으면 페트리 접시의 뚜껑에 접촉되어 오염될 염려가 있으므로 적절하게 양을 조절한다.
배지가 담긴 페트리 접시를 평평한 곳으로 옮겨 굳힌다.
배지에 기포가 형성된 경우에는 버너의 불꽃을 근접시켜서 기포를 없앤다.
(4) 결과 및 고찰(Results and Discussion)
배지를 직접 만들면서 배지의 제조방법에 대해 알게 되었다.
고찰 배지를 담을 유리용기는 가능한 깨끗한 것으로 사용한다.
거품이 일지 않도록 용기를 조심스럽게 흔들어 혼합한다.
분주 시 점성이 높은 한천배지에 화상을 입지 않도록 주의한다.
사면배지 조제 시 멸균시킨 시험관을 너무 경사지거나 배지양이 많아서 배지가 시험관 입구 근처에 도달하지 않도록 한다.
(5) 참고문헌
박영현 “식품미생물학 및 실험”, p11~26, 보문각, 2005

키워드

실험,   미생물,   배지,   시약,   실험기구