PCR (분생실험보고서)

목차

1. Introduction

2. Materials and Method

3. Results

4. Discussion
* PCR시에 주의해야 될 점

본문내용

1. Introduction
PCR(polymer chain reaction)은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA molecule의 어느 부분이든지 그 border sequence만 알면 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다.
PCR은 기본적으로 denaturation, annealing, extension의 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다.
기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소들에는 DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다.
PCR작용에서는 프라이머와 DNA복제에 필요한 요소들이DNA시료에 더해진다. 혼합물은 DNA를 변성시키기 위해 가열된다(예를 들면, 95℃에서 20초 동안℃). 그런 다음 온도는 낮추어져 (예를들면, 55℃에서 20초 동안) 프라이머가 상보적인 염기와 결합할 수 있게 한다. 그 후 온도를 다시 높여 (예를 들면, 72℃에서 20초동안) DNA복제가 일어날 수 있게 한다. 다시 새로운 복제 주기가 시작된다. 각 주기 여러 단계는 DNA변성온도와 프라이머 결합 온도 그리고 DNA복제온도가 각각 다르므로 온도조절에 의해 이루어진다. 약 20주기의 PCR에 의해 약 100만개의 증폭된 DNA 분자가 생기게 되고, 30주기는 약 10억 개를 형성하게 된다. 이 기술은 변성온도에서도 견딜 수 있는 온천 세균인 Themus aquaticus에서 추출한 DNA 중합효소 때문에 가능하다. 따라서 복제주기 이후에도 반응 혼합물에 새로운 요소들을 추가로 넣어 줄 필요가 없어 주기는 PCR 기계 속에서 계속 진행될 수가 있다(PCR기계란 단지 반응물을 둘러싸고 있는 물의 온도를 정확하게 그리고 빠르게 변화시킬 수 있는 수조에 불과한 것이다). 어떤 기계는 96개의 시료를 동시에 증폭시킬 수도 있다.
PCR은 미세위성 DNA(microsatellite DNA)를 증폭시켜 DNA 지문을 얻는데 사용되고 있다.

키워드

PCR,   분자생물학,   taq polymerase