[생물학] 미생물 형질 전환(Competent cell transformation) 실험

소개글

[생물학] 미생물 형질 전환(Competent cell transformation) 실험에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1-1. Competent cell이란?
1-2. Competent cell 의 제조방법

2-1. Transformation의 정의
2-1. Method

3. Transformation 과정

4. 실험방법

5. 참고문헌

본문내용

20~40 μl와 IPTG(839 mM) 5~10 μl를 미세원침관에서 섞어 배지위에 떨어뜨리고 밀대로 골고루 펴주면 되는데, 37°C에 적어도 10분 두었다가 박테리아를 도말하도록 한다. X-gal은 50 mg/ml의 농도로 dimethylformamide(DMF)에 녹여 빛이 차단된 용기에 담아 -20°C에 보관하고, IPTG는 2 g을 증류수에 녹여 10 ml 까지 채운다음 0.22 μm-filter하여 1 ml씩 나누어 -20°C에 보관한다.
* 위에서 만들어진 혼합액은 대략 1 ml 정도가 된다. 이 혼합액을 모두 plate에 떨어 뜨리고 밀면 잘 밀리지도 않고 물이 흘러 배양도 잘 되지 않는다. 그러므로 이 혼합액에서 적당량의 액체를 제거하는 방법으로 다음과 같은 방법을 쓴다.
1) 과정 5까지 끝낸 균 용액을 10,000 rpm에서 15초간 원심 분리한다.
2) 상층액을 약 850 μl 정도 버린다.
3) 나머지 150 μl로 침전물을 부유시키고, 이를 plate에 도말한다.
* 대부분의 경우 vector와 insert를 ligation한 DNA로 형질전환할 경우, 위와 같이 하면 colony들이 잘 분리되는 정도로 배양된다. 그러나 self ligation의 경우에는 colony가 너무 많이 생겨 colony들끼리 잘 분리되지 않는다. Double stranded circular DNA를 쓰는 경우에는 더욱 그러하므로, 위 과정을 경험적으로 조금씩 바꾸어 실험해야 할 것이다. 자신이 없는 경우는 균 혼합액을 10 μl, 100 μl, 나머지 용액 이렇게 나누어 도말해 보면 된다.
7. 37°C 배양기에서 plate를 뒤집어서 밤새 배양한다. 12～16시간이면 colony를 관찰할 수 있다.
5. 참고문헌
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_17.htm
http://nongae.gsnu.ac.kr/%7Ehdyun/Transformation.htm
http://genetics.hannam.ac.kr/lecture/lab-transf.htm
http://genetics.hannam.ac.kr/lecture/GELAB4.htm\\\
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/bacterial_transformation.htm#B. Competent cell의 제조

키워드

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