목차
1. 미생물 조작의 기초
1-1. 액체배지(Liquid Medium)의 조제
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 수행상의 주의사항
1-2. 무균조작
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
1-3. 미생물의 순수분리
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 수행상의 주의사항
1-4. 배양
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 수행상의 주의사항
1-5. 실험결과
1-6. 고찰
1-7. 참고문헌
1-1. 액체배지(Liquid Medium)의 조제
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 수행상의 주의사항
1-2. 무균조작
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
1-3. 미생물의 순수분리
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 수행상의 주의사항
1-4. 배양
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 수행상의 주의사항
1-5. 실험결과
1-6. 고찰
1-7. 참고문헌
본문내용
(월요일) : 배지 확인 미생물 자란 흔적 없음
2005년 3월 15일(화요일) : 배지 확인결과 Rodding 3번 배지에서 미생물이 자란 1개의 콜로니가 보임
2005년 3월 16일(수요일) : Rodding 3번 배지에만 미생물이 자라남 콜로니가 1개에서 2개로 늘어남
1-6 고 찰
Streaking한 3개의 Petri-Dish에서는 미생물이 전혀 자라지 않았다. 5조부터 9조까지 전부 Streaking으로 미생물을 순수 배양한 Petri-Dish 에서는 미생물이 자라지 않은것으로 보아서 미생물이 사멸한 시료에서 미생물을 분리하려고 해서 안자란 것으로 생각된다.
이것 말고도 실험하면서 백금루프를 가열한 상태에서 식히지 않고 콜로니를 뜨다가 미생물들이 다 죽어서 Petri-Dish에 배양해도 미생물이 자라지 않은 것으로도 생각된다.
Rodding한 3개의 Petri-Dish는 각각 수도물, 정수기물, 수도물+정수기물 1:1혼합한 물 의 미생물을 배양시켰다. 그중 정수기물의 Petri-Dish 에서만 미생물이 자라났고, 나머지 2개의 Petri-Dish에서는 안 자라났다.
왜 안 자라났는지 원인을 알아보니 먼저 Rodding하면서 삼각유리봉으로 살살 펴 준다는 생각으로 펴줬어야 했으나 열심히 펴주다 보니 배지가 패이게 되었다. 그러다 보니 미생물이 자라도 콜로니를 형성하지 못한 것 같다.
수도물의 경우 학교내 염소처리장을 거쳐서 학교로 들어오기 때문에 미생물이 다 사멸한 뒤에 나온다는 것이다.
그렇게 생각하기에는 또 다른 의문점은 정수기물에서는 미생물이 검출되었다는 것이다. 이것은 정수기 자체에서 약간의 미생물이 번식하고 있을수도 있는 것이고 실험도중에 공기중의 미생물이 유입되었을 가능성도 있다. 이것은 무균조작을 잘하지 못한데서 비롯된 것으로 보인다.
이러한 실수로 인해 미생물들이 자라날 수 있는 환경을 만들어주지 못해 잘 자라나지 않은 것으로 의견이 모아졌다
여기서 우리조는 무균조작의 중요성을 다시 한번 인식하게 되었고 눈에 안보일정도의 작은 미생물을 순수 배양하여 관찰하는 것은 미생물학실험에서 가장 기본이 되는 것으로 하나 하나 신중하게 실험해야 된다는 것을 알았다
NA배지의 조성에서 NaCl의 역할은?
① 막을 투과하는 물의 수동적 이동을 삼투(osmosis)라 한다. 삼투는 막을 통과한 물의 농도차이에 의존한다. 물에 녹아있는 용질의 농도가 높을수록 물의 농도는 낮은 채로 존재한다. 세균 세포는 일반적으로 살아있는 세포 내의 용질의 농도가 외부환경보다 높은 저장환경(hypotonic environment) 에서 잘 자란다. 물의 농도는 세포내 물의 농도와 비교하여 외부환경이 높기 때문에 삼투과정에 의해 세포 내로 물이 움직이게 된다. 적혈구와 같이 세포벽이 없는 세포가 저장환경에 놓여지게 되면 세포내로 물이 유입되어 터지게 되는데 이 과정을 용혈현상(plasmoptysis)이라 한다. 저장환경에서 세포벽은 세포의 형태를 유지하고 견고하게 한다.
고장환경(hypertonic environment)은 세포 내보다 외부환경이 용질의 농도가 높은 상태로서 세포가 이러한 환경에 존재하게 되면 물은 세포의 밖으로 나가게 된다. 세포의 물은 외부환경으로 빠져 나가서 세포벽으로부터 세포막이 떨어지는 원형질 분리(plasmolysis) 현상을 가져온다. 세포에서 생화학 반응을 중재하는 세포내 효소들은 수환경에서 최적의 활성을 나타내기 때문에 세포로부터 물의 유출은 효소의 활성이 손상되어 생장을 저해하는 결과를 초래한다. 원형질막과 관련된 물질전달 기능이 원형질 분리에 의해 방해된다는 것은 명백하다. 식품을 저장하기 위한 염(NaCl)이나 당(sugar)의 첨가는 이러한 삼투현상을 이용하는 것이다.
② 각 세균에 따라 증식에 필요한 영양소의 종류도 매우 다양하므로 세균을 증식시키고자 할때는 각 세균의 증식조건에 맞추어 증식환경을 조절해야 한다. 세균증식에 필요한 일반적인 영양원으로는 물(HO)과 무기이온, 질소원, 탄소원으로 구분할수 있다.
물은 세균 균체의 화학조성의 70%를 차지하고 있으며 모든 세포성분의 용매 또는 각종 대사계의 활동매개체로서 없어서는 안되는 중요한 성분이다.
무기이온은 침투압 조정에 관계되는 외에 미량은 금속이온(Fe, Mg, Zn, Co, Na, K)은 증식의 보조작용을 나타내며, 음이온(Cl, SO, PO등)이 필요하다.
질소원은 세균균체의 구성요소 또는 각종 효소계의 성분으로 단백질, 퓨린 피리미딘을 함유하고 있으므로 이들 기본재료로서 질소화합물을 필요로 한다.
탄소원은 병원성 세균의 거의 전부가 타력영양성균이기 때문에 대사에 필요한 에너지는 유기탄소화합물의 분해로 얻는다 광합성균은 무기물을 산화시켜 에너지를 획득하는 균으로서, CO를 탄소원으로 하여 탄수화물을 합성하고 있으며, 일반세균은 탄소원으로 포도당 등 탄수화물을 필요로 한다.
배지를 배양기에 넣을때 왜 거꾸로 넣는가?
Streaking이나 Rodding한 배지를 배양기에 넣을때 거꾸로 넣지 않는다면 미생물들이 호흡할 때 생기는 수증기가 Petri-Dish 천장부분에 맺혀 미생물들 사이로 떨어지게 된다. 수증기가 많이 발생되게 되면 물이 많이 떨여져 미생물이 자라날 환경을 악화시키게 된고 원하는 실험결과를 얻을수 없다. 그렇기 때문에 배양기에 넣을때는 거꾸로 넣게 되는것이다.
1-7 참고문헌 / SITE
미생물 실험서 이서래, 윤재영 공저 효일문화사 1995
미생물학 실험 오계현, 소재성, 송홍규 공저 신광문화사 2000
미생물학 실험서 한국미생물학회 편자 을유문화사 1998
미생물의 생물학 저자 : ThomasD. Brock. Michael T. Madian
역자 : 김병홍. 김치경. 민경희. 윤권상. 이평우. 전순배. 최영길
범한서적주식회사. 1992.8.15
미생물학 전북대 의과대학교수 하대유 편저 신일상사
http://blog.naver.com/mocha0821/120001655370(개인 홈페이지)
http://cafe.daum.net/skkuMCB(성균관대 미생물 실험실 카페)
http://cafe.daum.net/fungi(fungi~들의 모임)
2005년 3월 15일(화요일) : 배지 확인결과 Rodding 3번 배지에서 미생물이 자란 1개의 콜로니가 보임
2005년 3월 16일(수요일) : Rodding 3번 배지에만 미생물이 자라남 콜로니가 1개에서 2개로 늘어남
1-6 고 찰
Streaking한 3개의 Petri-Dish에서는 미생물이 전혀 자라지 않았다. 5조부터 9조까지 전부 Streaking으로 미생물을 순수 배양한 Petri-Dish 에서는 미생물이 자라지 않은것으로 보아서 미생물이 사멸한 시료에서 미생물을 분리하려고 해서 안자란 것으로 생각된다.
이것 말고도 실험하면서 백금루프를 가열한 상태에서 식히지 않고 콜로니를 뜨다가 미생물들이 다 죽어서 Petri-Dish에 배양해도 미생물이 자라지 않은 것으로도 생각된다.
Rodding한 3개의 Petri-Dish는 각각 수도물, 정수기물, 수도물+정수기물 1:1혼합한 물 의 미생물을 배양시켰다. 그중 정수기물의 Petri-Dish 에서만 미생물이 자라났고, 나머지 2개의 Petri-Dish에서는 안 자라났다.
왜 안 자라났는지 원인을 알아보니 먼저 Rodding하면서 삼각유리봉으로 살살 펴 준다는 생각으로 펴줬어야 했으나 열심히 펴주다 보니 배지가 패이게 되었다. 그러다 보니 미생물이 자라도 콜로니를 형성하지 못한 것 같다.
수도물의 경우 학교내 염소처리장을 거쳐서 학교로 들어오기 때문에 미생물이 다 사멸한 뒤에 나온다는 것이다.
그렇게 생각하기에는 또 다른 의문점은 정수기물에서는 미생물이 검출되었다는 것이다. 이것은 정수기 자체에서 약간의 미생물이 번식하고 있을수도 있는 것이고 실험도중에 공기중의 미생물이 유입되었을 가능성도 있다. 이것은 무균조작을 잘하지 못한데서 비롯된 것으로 보인다.
이러한 실수로 인해 미생물들이 자라날 수 있는 환경을 만들어주지 못해 잘 자라나지 않은 것으로 의견이 모아졌다
여기서 우리조는 무균조작의 중요성을 다시 한번 인식하게 되었고 눈에 안보일정도의 작은 미생물을 순수 배양하여 관찰하는 것은 미생물학실험에서 가장 기본이 되는 것으로 하나 하나 신중하게 실험해야 된다는 것을 알았다
NA배지의 조성에서 NaCl의 역할은?
① 막을 투과하는 물의 수동적 이동을 삼투(osmosis)라 한다. 삼투는 막을 통과한 물의 농도차이에 의존한다. 물에 녹아있는 용질의 농도가 높을수록 물의 농도는 낮은 채로 존재한다. 세균 세포는 일반적으로 살아있는 세포 내의 용질의 농도가 외부환경보다 높은 저장환경(hypotonic environment) 에서 잘 자란다. 물의 농도는 세포내 물의 농도와 비교하여 외부환경이 높기 때문에 삼투과정에 의해 세포 내로 물이 움직이게 된다. 적혈구와 같이 세포벽이 없는 세포가 저장환경에 놓여지게 되면 세포내로 물이 유입되어 터지게 되는데 이 과정을 용혈현상(plasmoptysis)이라 한다. 저장환경에서 세포벽은 세포의 형태를 유지하고 견고하게 한다.
고장환경(hypertonic environment)은 세포 내보다 외부환경이 용질의 농도가 높은 상태로서 세포가 이러한 환경에 존재하게 되면 물은 세포의 밖으로 나가게 된다. 세포의 물은 외부환경으로 빠져 나가서 세포벽으로부터 세포막이 떨어지는 원형질 분리(plasmolysis) 현상을 가져온다. 세포에서 생화학 반응을 중재하는 세포내 효소들은 수환경에서 최적의 활성을 나타내기 때문에 세포로부터 물의 유출은 효소의 활성이 손상되어 생장을 저해하는 결과를 초래한다. 원형질막과 관련된 물질전달 기능이 원형질 분리에 의해 방해된다는 것은 명백하다. 식품을 저장하기 위한 염(NaCl)이나 당(sugar)의 첨가는 이러한 삼투현상을 이용하는 것이다.
② 각 세균에 따라 증식에 필요한 영양소의 종류도 매우 다양하므로 세균을 증식시키고자 할때는 각 세균의 증식조건에 맞추어 증식환경을 조절해야 한다. 세균증식에 필요한 일반적인 영양원으로는 물(HO)과 무기이온, 질소원, 탄소원으로 구분할수 있다.
물은 세균 균체의 화학조성의 70%를 차지하고 있으며 모든 세포성분의 용매 또는 각종 대사계의 활동매개체로서 없어서는 안되는 중요한 성분이다.
무기이온은 침투압 조정에 관계되는 외에 미량은 금속이온(Fe, Mg, Zn, Co, Na, K)은 증식의 보조작용을 나타내며, 음이온(Cl, SO, PO등)이 필요하다.
질소원은 세균균체의 구성요소 또는 각종 효소계의 성분으로 단백질, 퓨린 피리미딘을 함유하고 있으므로 이들 기본재료로서 질소화합물을 필요로 한다.
탄소원은 병원성 세균의 거의 전부가 타력영양성균이기 때문에 대사에 필요한 에너지는 유기탄소화합물의 분해로 얻는다 광합성균은 무기물을 산화시켜 에너지를 획득하는 균으로서, CO를 탄소원으로 하여 탄수화물을 합성하고 있으며, 일반세균은 탄소원으로 포도당 등 탄수화물을 필요로 한다.
배지를 배양기에 넣을때 왜 거꾸로 넣는가?
Streaking이나 Rodding한 배지를 배양기에 넣을때 거꾸로 넣지 않는다면 미생물들이 호흡할 때 생기는 수증기가 Petri-Dish 천장부분에 맺혀 미생물들 사이로 떨어지게 된다. 수증기가 많이 발생되게 되면 물이 많이 떨여져 미생물이 자라날 환경을 악화시키게 된고 원하는 실험결과를 얻을수 없다. 그렇기 때문에 배양기에 넣을때는 거꾸로 넣게 되는것이다.
1-7 참고문헌 / SITE
미생물 실험서 이서래, 윤재영 공저 효일문화사 1995
미생물학 실험 오계현, 소재성, 송홍규 공저 신광문화사 2000
미생물학 실험서 한국미생물학회 편자 을유문화사 1998
미생물의 생물학 저자 : ThomasD. Brock. Michael T. Madian
역자 : 김병홍. 김치경. 민경희. 윤권상. 이평우. 전순배. 최영길
범한서적주식회사. 1992.8.15
미생물학 전북대 의과대학교수 하대유 편저 신일상사
http://blog.naver.com/mocha0821/120001655370(개인 홈페이지)
http://cafe.daum.net/skkuMCB(성균관대 미생물 실험실 카페)
http://cafe.daum.net/fungi(fungi~들의 모임)
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