플라스미드 DNA의 추출(Purification of Plasmid DNA)

소개글

플라스미드 DNA의 추출(Purification of Plasmid DNA)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. title

2. summary

3. introduction

4.Materials & Methods

5. Results and Discussion

6. Reference

본문내용

않다고 생각하지만 supercoiled DNA만 얻기 위해서(한 개의 밴드만 표지되게 하기 위해서) tip이나 tube를 좀 더 조심하게 다뤄야 한다는 것을 느꼈고, 다음번에 또 실험 할 기회가 생긴다면 너무 충격이 가지 않도록 다루고 pipette도 능숙히 다룰 수 있어야겠다.
UV하에서 DNA가 관찰되는 원리
- Ethidium bromide의 특성
Ethidium bromide(EtBr)은 DNA염기 사이로 끼어드는 평면구조를 가진다. 유리형의 EtBr은 형광능이 작지만 DNA 염기사이에 결합한 결합형이 되면 유리형의 EtBr보다 형광이 증가하여 관찰이 용이하게 된다. DNA가 253nm의 자외선을 흡수하게 되면 파장이 EtBr에 전달되고, DNA에 302nm와 336nm의 파장이 주어져서 흡수하면 색소 자체에 자외선이 흡수되어 590nm의 주황색의 형광 가시광선을 내게 된다. EtBr은 한 가닥과 쌍 가닥(이중가닥) DNA 및 RNA의 관찰에 모두 사용될 수 있으나 친화성은 쌍 가닥에서 더 강하므로 DNA 이중가닥의 관찰이 주로 사용된다. 여러 DNA형태를 알아내기 위한 확실한 방법은 EtBr의 농도를 증가시키는 것인데, 농도가 증가되면 DNA 이중가닥이 변성되면서 부피가 커지면서 DNA가 많은 양의 EtBr과 결합하게 되어 더 잘 관찰 할 수 있게 된다.
같은 DNA이지만 이동속도에 차이가 생긴 이유
- Supercoiled(closed circular) DNA와 open circular DNA
세포(대장균)로부터 분리한 plasmid DNA 를 전기 영동하게 되면 오른쪽 사진과
같은 결과를 얻게 된다.
분리가 아주 잘 되면 supercoiled DNA (초나선 DNA)만 관찰되지만 분리과정에서 충격을 받게 되는 경우 open circular
(열린 원형) 형태가 생기기도 한다.
보통 plasmid DNA는 초나선 구조로 존재하지만
충격으로 인해 두가닥 중 한 가닥에 틈(nick)이 생기면 supercoil형태가 풀어져서 열린 고리형태가 된다.(아래 그림 참조) plasmid DNA는 같은 DNA라도 초나선형, 선형, 열린 고리형 형태로 존재하는데, 전기영동하면 같은 염기서열을 가진 같은 크기의 DNA라 하더라도 이동하는 거리는 각각 다르게 나타난다. size marker로 사용하는 짧은 DNA는 선형의 DNA이다. 따라서 전기영동으로 size를 비교할 수 있는 DNA는 선형 DNA이다.
6. Reference
분자생물학 실험서/ 김영희/ 월드사이언스/ p.66-68, 81
생명공학 2판/ 월드사이언스/ 오계헌 외 3명/ p. 61
생물학총론 분자생물학과 유전/ 에코에티카/ 강치욱 편저/ p. 210
분자생물학/ 아카데미서적/ 한국분자생물학회 편/ p. 397~398
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_20.php
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/agarose_gel.php

키워드

plasmid DNA,   Purification of Plasmid DNA,   Cell lysis,   Electrophoresis,   Agarose gel eletrophoresis,   용액Ⅰ(EDTA, glucose),   Ethidium bromide의 특성,   Supercoiled(closed circular) DNA