PCR및gelelectrophoresis(전기영동)

목차

1. Title

2. Date

3. Name

4. Purpose

5. Materials

6. Methods

7. Results

8. Discussion.

9. Project

10. Reference

본문내용

henol blue가 들어 있어서 electrophoresis하는 동안에 현재 어느 정도 진행되어 있나 눈으로 보아 알 수 있게 해 준다
③ EtBr이 무엇인지 조사하세요. (전기영동에서의 역할, toxic한 이유)
- 아가로즈 gel 전기영동 실험을 할 때, 형광 표지(핵산 염색)로 많이 사용이 되는 intercalating agent이다. 이것은 보통 줄여서 EtBr이라고 부르는데, 자외선에 노출시켰을 때, 오렌지 색으로 발색하게 되고, DNA와 결합한 것이 하지 않은 것에 비해 20배 가량 강도가 강해진다. EtBr은 실험실에서 핵산을 detection할 때 많이 사용된다. DNA의 경우, PCR product, fragment등 항상 double-stranded DNA로 존재한다. Single-stranded RNA는 보통 스스로 folding되기 때문에 끼어들어간 dye에 의해 부분적인 base pairing이 일어나 detection이 가능하다. gel 상에 있는 핵산은 254nm파장의 UV가 DNA에 부딪힐 때 302~366nm의 파장으로 반사되는데 이 빛은 EtBr에 흡수된 후 590nm정도의 가시광선으로 변화한다. EtBr은 전기영동이 끝난 gel을 염색하기도 하고, gel을 만들 때 미리 넣어 만들기도 한다. 이때 농도는 gel 1ml에 0.5ug정도 내외가 적당하다. EtBr을 미리 넣어 전기영동 하는 방법과 전기영동이 끝 난 후 염색하는 방법의 경우 그 결과가 달라질 수 있는데 이 이유는 EtBr이 DNA에 붙어 있는 경우 분자량이 변하고 구조적으로 아가로즈 gel을 통과할 때 저항을 더 받게 되어 속도가 10~15%정도 차이가 나게 된다.
그리고 EtBr이 독성을 띠는 이유는EtBr은 얇은 판 모양의 고리화합물로 DNA나선의 염기사이에 끼어 들어가 결합하기 때문에 강력한 발암물질로 알려져 있다.
10. Reference
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_08.php(PCR의 원리)
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_11.php(전기영동의 원리)
http://www.vcu.edu/oehs/chemical/etbr.pdf(EtBr이 무엇인가)
생명과학 길라잡이, Ricki Lewis 외 3인, 라이프 사이언스, p194~195

키워드

pcr gelelectrophoresis,   전기영동,   생물,   보고서,   실습