경희대학교 분자생물학 실험 (SUBCLONING, GST)

소개글

경희대학교 분자생물학 실험 (SUBCLONING, GST)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

INTRODUCTION
-RPM
-GST
-PGEX
MATERAIL& PROCEDURE
RESULT
DISCUSSION

본문내용

p
Result
1,2,3,4,5,6,9 조 : 뚜렷한 5kb line과 0.35 kb line 관찰, 3kb의 흐릿한 line 관찰
7조 : 뚜렷한 5kb line과 흐릿한 3kb 관찰 0.35kb 관찰 불가능
8조 : 3kb 및 0.35kb 관찰 불가능
11조 : 0.35kb 관찰 불가능
Discussion
이번실험은 그간의 실험과정의 최종 확인작업으로써, 지난시간 실험했던 내용이 Com.cell의 colony Gene의 supercoiled form 형태를 관찰하는것이 목적이었다면 이번 실험은 관찰한 supercoiled form을 Bamh1 및 Xho1으로 자른 뒤 그것이 PGEX6P-1과 genex가 나왔는지를 확인하는 실험이다. 지난시간 실험했었던 gene의 형태는 supercoiled form 이었기 때문에 agarose 결과 3kb에 해당하는 6번째 marker에서 확인 할 수 있었는데, 이번 실험에서 제한효소 bamh1과 xho1으로 자르면서 vecter의 form이 supercoiled form이 펴져 linear form으로 바뀐것을 marker가 5kb를 나타냄으로써 확인 할 수 있었다. 그리고 5kb marker앞에 3kb~4kb marker 에 흐릿하게 표지된 gene은 supercoiled form이 제한효소에 의해 잘라지 않은 효소로 생각되며 그 이유는 agarose gel에서 선명하게 관찰하기 위해 이번 실험에서 투입한 DNA의 양이 많기 때문으로 생각된다. 또한 몇몇 조의 결과에서 geneX에 해당하는 0.35kb marker를 관찰할수 없었는데 그 이유는 electrophoresis를 오랜시간 진행해서 geneX가 Gel 바깥으로 빠져 나간 것으로 추측된다.
pGEX 계열 vector는 mcs 앞부분에 GST(glutathione-S-transferase) 생성 GENE을 가지고 있어 GST 를 생성하는데 기질과 강한 친화력(affinity)을 가진다는 것에 착안해서 유전자에 의해서 발현되어 자신이 정제하고자 하는 단백질 앞에 fusion protein을 만들어 정제를 하는 용도로 사용된다.
Reference
1. 네이버 백과사전 “RPM"
2. 건국대학교 유전단백체 기능제어 연구센터 (Functional Genoproteome Research Centre)
“Gene cloning"
http://www.genehunters.co.kr/Training/01_1_2.htm

키워드

supercoiled form,   linar form,   GST,   AMPHICILLIN,   암피실린,   agarose