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heat shock proteins. Am J Physiol 273:937-945, 1997
32.Panteghini M, Pagani F, Bonora R Clinical and analytical evaluation of a continuous enzymatic method for measuring pancreatic lipase activity. Clin Chem. 39:304-308 1993,
33.Norman J, The role of cytokines in the pathogenesis of acute pancreatit
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heat-shock) 처리이후 즉시 항생제를 포함한 선택배지에 배양해서는 바람직한 결과를 얻기 힘들다. 먼저 항생제가 없는 액체배지에서 짧은 시간 동안 항온(incubation)시켜 세포 내에 저항효소를 축적한 후에야 선택배지에 박테리아를 배양해야 한
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heat-shock을 이용하였다. heat-shock 외에 transformation을 시킬 수 있는 방법에는 어떠한 것들이 있을까?
- electroporation : 고전압의 전기를 흘려 DNA가 들어가도록 하는 방법
- bacteriophage : 박테리아를 숙주로 하는 파지에 도입코자 하는 DNA를 넣고 감염
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4. 실험과정
(1) PCR
(2) Ligation
(3) Transformation & seeding
- ① Ligation 시킨 반응물 5 ㎕를 Top 10 competent cell에 첨가한다.
② 얼음에 5분간 방치한다.
③ 42℃에서 30초간 heat-shock 시키고 즉시 얼음에 1~2분간 둔다.
④ SOC 배지 200 ㎕를 가하고 37도 incu
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heating block에서 42℃로 50sec 동안 cell을 heat-shocking 한다.(주의: 60s 넘기지 말것).
⑦ 바로 얼음에 2분간 둔다.
⑧ LB(no ampicillin) 950㎕ 첨가 후 2회 정도 inverting 해 준다. (cc의 경우 900 ㎕)
⑨ 1시간 30분 동안 37℃에서 incubation한다.
⑩ Ampicillin 넣은 A
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