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목차
1. 서 론
2. 실험 방법
2.1. LB Agarose 배지와 LB Broth 제조 및 멸균
2.2. LB-Ampicilin 첨가
2.3. E. coli JM109 (pGEM-T-Easy-DXS, pBlueScript-KS(+)) 접종
2.4. Plasmid 분리
2.5. 제한 효소 절단
2.6. Agarose Gel 제작
2.7. 전기영동 및 DNA 확인
3. 결과
3.1. E. c
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제한효소의 기능
- 제한효소는 DNA의 특정한 염기의 배열을 식별하고, 이중 사슬을 절단하는 효소로, 이번 실험에서는 EcoR Ⅰ, Nde Ⅰ, Xho Ⅰ의 3가지 제한효소를 사용한다.
⑦ Electrophoresis apparatus (전기영동장치)
⑧ Electrophoresis agarose
Fig 13. Electr
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DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다.
(2) 제한효소의 종류
제한효소는 3가지로 나눌 수 있으며, 실험실에서 사용되는 것은 대부분 type II이다.
ㄱ. Type I restriction enzyme : DNA의 특정부위를 인식하긴 하지만 인식된 부위가 아닌 다른 부위를 절단한다
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전기 영동 결과 DNA 덩어리를 확인할수 없었으며, 실험 조교의 재실험으로 위와 같은 DNA덩어리가 나와야 함을 확인 할수 있었다.
DATE:2004.10.28
4. Recovery of DNA from Agarose gels
summary:
DNA를 제한효소로 절단한 뒤 전기영동을 통해 DNA를 분리해서 우리
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Electrophoresis (전기영동)
Electroporation (전기천공법)
End-filling
Endonuclease
Episome
Ethanol precipitation (에탄올 침전법)
Ethidium bromid (EtBr)
Exonuclease (핵산말단가수분해효소)
Expression Vector
Fermenter
Field inversion gel electrophoresis(FIGE)
Fluorescence in situ
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전기영동
생물나라, https://www.biozoa.co.kr , DNA marker
S. Robertson, Encyclopedia of life sciences, London: Nature Publishing Group, 2002
분자생물학, 한국분자생물학회, 아카데미서적, 8-10P, 15-17P 실험 목적
실험 이론
실험기구 및 시약
실험방법
결과 및 결론
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DNA의 크기는 4177-35+1137=5279bp이다. supercoiled form의 위치는 DNA marker와 비교해보았을 때 3000~4000bp임을 알 수 있는데 supercoiled form은 원래의 길이보다 표면적이 더 낮아 조금 더 낮은 bp에서 뜨기 때문에 본 실험에서 전기영동한 DNA는 성공적으로 재
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DNA는 선형 DNA보다 빠르게 움직인다.
아가로오스 농도 (% W/V)
DNA의 분리범위 (kb)
0.3
5 - 60
0.6
1 - 20
0.7
0.8 - 10
0.9
0.5 - 7
1.2
0.4 - 6
1.5
0.2 - 3
2.0
0.1 - 2
※ Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
1) DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한
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DNA bands?
제한 효소가 어느 정도 작용하고, 그 일을 수행한 정도에 따라서 달라진다. 실험 환경도(특히 온도, pH)영향을 미칠 것이다.
7. 실험 반성 및 개선 방안
이번 실험도 저번과 같이 제대로 된 수치 값없이 실험을 종결하여 데이터를 정리하
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실험방법
1. plasmid isolation(Ammonium acetate 법
2. DNA Restriction (Vector 제작
3. pS44 DNA restriction
4. Electrophoresis
5. PCR (polymerase chain reaction
6. Elution ;Gene clean kitⅢ(Bio101
7. Ligation
8. Competent cell 제조 (DH5α) - CaCl2 법 사용
9. Transformation (H
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