[생리학 생화학 실험]Rat 조직의 단백질 추출 정량 total rna 추출 실험 결과레포트

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본문내용

Ⅵ. Method
<단백질 추출>
① -80℃에 보관 되어있는 조직을 꺼내어 30mg정도(쌀 반톨크기) 잘라 얼음 위의 petridish에 담는다.
☞남은 조직은 다시 deep freezer에 보관한다.
② 얼음 위의 petridish안에 있는 조직을 가위로 최대한 잘게 chopping준다.
③ RIPA buffer(500ul)를 petridish위의 조직에 뿌린다.
④ 잘게 chopping한 조직을 1.5ml EP tube에 옮겨 담고 균질화한다.
☞샘플간의 시간차이가 최대한 나지 않게 한다.
⑤ 20분간 incubation한다
⑥ 4℃에서 원심분리(13000rpm, 30분)한다
⑦ 새로운 1.5ml EP tube에 200ul씩 총 400ul의 상층액을 분리하여 옮겨담는다.
☞ 하층부의 pellet이나 colon과 kidney조직의 지방불순물이 혼합되지 않도록 한다.

<단백질 정량>
① Protein sample과 BSA를 얼음위에서 녹인다.
② 샘플과 blank에 들어간 DW 8ul를 먼저 넣는다.,
③ 96well plate에 1mg/ml BSA를 ½로 serial dilution한다.
④ Blank 값을 자을 buffer를 5배 희석하여 넣어준다.

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