[만점레포트] 면역시냅스 (immunological synapse)의 형성_실험 과정과 분석 방법

소개글

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목차

Ⅰ. Objective

Ⅱ. Assay Principle
1) Antigen-presenting cell(APC)

2) Immunological synapse
①c-SMAC(central-SMAC)
②p-SMAC(peripheral-SMAC)
③d-SMAC(distal-SMAC)
-T cell activation에 관여하는 ligand-receptor pairs: CD3, CD28
-immunological synapse의 형성과정
-immunological synapse의 형성에 따른 TCR-mediated signaling과정

3)F-actin
4) Phalloidin
-phalloidin을 실험에서 사용하는 이유

Ⅲ. Materials, 각 materials의 역할
Ⅳ. Assay protocol
1) 18mm cover slip coating
2) Jurkat T cell에 bead 넣기
3) cover slip에 cell을 분주
4) 4% PFA를 이용한 fixing
5) 0.1% triton-100을 이용한 permeabilization
6) 3% BSA in PBS를 이용한 blocking
7) F-actin을 이용한 staining
8) mounting
9) 현미경 immunological synapse 관찰

Ⅴ. Results & Observation
-Result의 해석
-immunological synapse 형성의 생물학적 의미
1)antigen presenting cell(APC)의 activation
2)activation된 dendritic cell은, immunological synapse를 통해 naïve T cell을 activation
3)macrophage와 B cell은, immunological synapse를 통해 effector T cell을 activation
4) immunological synapse 형성의 생물학적 의미

본문내용

Ⅰ. Objective
T cell과 antigen presenting cell(APC)이 이루는 immunological synapse를 확인 및 관찰하고자 한다. Jurkat T cell에 anti-CD3,CD28 conjugated bead를 처리하면 bead가 APC의 역할을 하여, T cell과 immunological synapse와 같은 형태를 형성하게 될 것이므로, phalloidin에 FITC가 tagging된 시약으로 F-actin을 염색하여, immunological synapse를 확인 및 관찰한다.
이러한 실험을 통해, antigen-presenting cell의 기능, immunological synapse의 구성 및 형성 과정, phalloidin의 실험적 활용을 이해하고, 궁극적으로는 immunological synapse 형성의 biological meaning을 이해하고자 한다.

Ⅱ. Assay Principle
1) Antigen-presenting cell(APC)
-의미: Antigen-presenting cell 혹은 accessory cell은, 그 surface에서 major histocompatibility complexes(MHCs)와 결합된 antigen을 display하는 cell을 뜻한다. 이처럼 cell surface에서 major histocompatibility complexes(MHCs)와 결합된 antigen을 display하는 것을 antigen presentation이라 한다.
-종류: macrophages, B cells, dendritic cells 등이 포함된다.
-기능: APCs는 antigen을 processing하여 T cell에 제시하여, T cell을 activation시키는 역할을 한다. 각 APC의 종류에 따른 기능은 아래와 같다.

키워드

면역 시냅스,   immunological synapse,   T cell,   antigen presenting cell,   phalloidin,   F-actin,   ATG,   SMAC,   TCR-mediated signaling