[이화여대 생명과학실험3 분반1등 A+ 레포트] Detection of Antibody

소개글

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목차

I. Objective

II. Assay Principle
1. Antibody
2. B Cell Maturation and Humoral Response
3. TD/TI Antigen
4. ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

III. Materials

IV. Assay Protocol
1. Cell Culturing
2. Supernatant Harvesting
3. ELISA

V. Result & Observation
1. Result
2. Discussion

VI. References

본문내용

I. Objective
Sandwich ELISA 실험 기법을 이용하여 분비된 antibody를 정량 및 정성 분석한다. Simulator로 α-IgM만 있는 condition, LPS만 있는 condition, α-IgM과 α-CD40이 있는 condition, 그리고 α-IgM과 α-CD40와 IL-4이 있는 condition에서 B cell을 culture한 후, 각 condition에서 어떤 isotype의 antibody가 얼만큼 분비되었는지 분석한다. 이를 통해 B cell activation과 class switching의 과정, humoral response,그리고 TI/TD antigen의 차이 등을이해한다.

II. Assay Principle
1. Antibody
Antibody는 B cell이 생산한 immunoglobulin glycoprotein으로, antigen의 epitope 부분과 specific한 binding을 할 수 있다. 이들은 molecular weight가 더 작은 두 개의 light chain과 molecular weight가 더 큰 두 개의 heavy chain이 disulfide bond으로 연결되어 Y-shape를 이룬다. Y-shape의 양쪽 끝은 variable region으로, light Figure 1. Structure of antibody chain과 heavy chain의 N-말단이 다양한 아미노산 sequence으로 이루어져 있어 그에 맞는 specific한 antigen과 결합한다. 그 외의 부분은 constant region으로, variable region과는 달리 아미노산 sequence가 고정되어 있다.

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