Polymerase Chain Reaction

목차

1. 실험목적

2. 실험원리

3. 고찰

4. 참고문헌

본문내용

cle에 product의 양이 두배 정도 차이가 난다. Touchdown PCR에서는 2 cycle 마다 온도를 낮췄으므로 1℃에 product의 양이 4배가 차이나는 셈이다. 이것을 이용해서 Tm을 알 수 있다. (즉 온도가 1도 내려갔을 때 product의 양이 4배 증가한 과정에서의 temperature가 Tm이 된다.)
9) Long Accurate PCR
일반적으로 PCR로는 많아야 3kb, 좀 더 이상적일려면 1kb 미만의 크기의 DNA를 증폭할 수 있으나 이 방법을 사용하면 5-40kb의 DNA도 증폭할 수 있다. 이 long accurate PCR에서는 polymerase를 두 개 사용하는데, 그중 하나가 minor-proofreading을 할 수 있어서, 긴 DNA를 증폭할 때 error rate를 감소시켜 준다.
10) Asymmetric PCR
Single strand를 얻을 목적으로 이용하는 PCR방법이다. Primer를 두 개 사용하는데 두 primer를 농도가 100:1로 섞어 사용한다. PCR의 초기에 한쪽의 primer는 소비되어 버리고 과잉의 primer에서 single strand DNA가 생성된다
11) Nest PCR
한번 PCR로 증폭한 DNA 단편을 한번 더 내부의 primer를 사용하여 증폭하는 방법이다. 이는 비 특이적 반응을 감소 시키며, PCR을 2회 실시하므로 감도가 상승하는 효과를 얻을 수 있다.
12) Inverse PCR
Inverse PCR은 기존에 서열을 알고 있는 DNA의 양 옆에 서열을 알지 못하는 region이 있고, 이것을 알고자 할 때 많이 이용된다. 예를 들어
******=========****** (** 서열을 알지 못함, == 서열을 알고 있음)
이런 염기 서열에서 ** 부분을 알고자 할 때 이용한다. 제일 먼저 제한 효소로 자르고, 자른 부위를 원으로 만든다. (자른 부위가 sticky end이므로 가능하다.) 그리고 그 원으로 된 곳에다가 primer를 붙이는데, 이 때 elongation이 같은 방향으로 가도록 primer를 붙인다. Inverse라는 말은 primer가 기존의 PCR과는 다른 방향으로 간다고 해서 붙여졌다.
3. 고찰
생명과학의 기초와 응용에 관한 연구가 진전되면 보다 많은 유전자나 단백질에 관한 정보가 필요하게 된다. 원하는 생명의 정보에 대하여 정확하고 빠르게 대응하지 않으면 안되는 것은 유전자나 단백질의 정보가 없으면 생명과학에 있어서 새로운 유전자나 단백질이 가지는 정보를 해명하는 것이 불가능하기 때문이다. PCR은 해석을 필요로 하고 있는 유전 부위를 증폭하는데 있으므로 보다 빠르게, 보다 정확하게 연구결과를 얻기 쉽게 해준다. PCR의 원리부터 시작해서 응용까지 실험 보고서를 쓰면서 잘 알아보게 되었다.
4. 참고문헌
최용락, 정수열, 이영춘 “PCR 실험의 원리와 응용”, 세종출판사(2003)
Taketoshi Tanigchi “PCR 실험노트”, 월드 사이언스 (2002)
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키워드

Polymerase,   Chain,   Reaction