FPLC 결과레포트

소개글

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목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험 장치 및 방법
4. 결과 및 분석
6. 토의 및 결론
7. 참고 문헌

본문내용

정하여 고분자의 분자량을 산출할 수 있도록 한 것이다. GPC는 고분자의 분자량(M.W.)과 분자량 분포(M.W.D.)를 결정하는 가장 기본적인 방법으로 용출법에 의한 액상-고상형의 액체 크로마토그래피의 일종으로 이미 분자량을 알고 있는 표준시료(standard sample)와 새로운 시료(unknown sample)의 상대적인 평균 분자량과 분자량의 분포를 결정하는데 사용된다. 저분자 물질과 달리 고분자 물질은 중합속도의 차이에 의한 사슬 길이의 분포(분자량 분포) 및 중합도(DP)가 존재하게 되는데 고분자의 분자량과 분자량 분포는 고분자 물질의 역학적 성질, 열적 성질 그리고 기계적 성질에 큰 영향을 미치게 되고 최종적으로 가공성의 차이를 나타나게 한다.
실험에 사용된 단백질의 종류는 BSA (Bovine Serum Albumin), IgG (Immunoglobulin G), cytochrome C, beta-lactogrobulin, cytidin 총 5개이며 이 여러 가지 분자량을 가진 용질이 용해되어 있는 용액을 충진 column의 윗부분에 투입한 후 용질이 함유되어 있지 않은 용매만을 coulmn에 공급하면 분자량이 큰 물질은 충진 물질의 공극을 통과하지 않고 입자사이로 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 빠르다. 반면에 분자량이 작은 물질은 입자의 공극을 돌아다니다가 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 오래 걸린다. 이러한 분자량과 column의 통과시간 사이의 관계를 이용하면 시료의 분자량을 측정할 수 있게 된다. Column을 통과한 단백질용액을 일정한 부피씩 분취기 (Fraction Collector)로 받아내는 동시에 용액의 흡광도를 280nm에서 측정하면 결과와 같은 그림이 나오게 되는 것이다. 실험을 통해 분자량이 서로 다른 단백질 용질을 함유하고 있는 용액을 column을 통과한 후 용액의 흡광도와 통과 부피와의 관계를 나타낼 수 있다. 각 용질 단백질들이 분자량이 큰 물질부터 column을 빠져나오는 것을 알 수 있다. 그 결과 분자량이 큰 IgG , BSA ,beta-lactogrobulin, cytochrome C, cytidine순으로 Column을 통해 나오는 것을 관찰 할수 있다. 이의 관계를 이용해 스탠다드 시료와의 시간의 비교로 미지시료에 몇 가지 단백질이 포함되었는지 어떤 단백질이 포함되었는지 알 수 있었다. 또 스탠다드 시료 결과값중 area값을 이용해 각 단백질이 얼마의 농도로 포함되어 있는지도 알 수 있었다. 우리가 넣어준 스탠다드의 농도는 1mg/ml로 각 단백질이 1mg씩 포함되어 있었다. 미지시료와 비교해 보았더니 미지시료의 농도와 질량을 알 수 있었다.
5-2. 결론
미지시료는 BSA ,beta-lactogrobulin, cytochrome C을 포함하고 있는것을 알 수 있었고, 미지시료의 농도가 어떻게 이루어져 있는지 알 수 있었다.
6. 참고문헌
물질전달 및 분리공정. 지인당. 박창호, 김우식, 정인식 공저. 1999,7,30
- p283~306

키워드

FPLC,   GPC,   분리정제