[아주대-생물학실험] (결과) DNA의 구조 및 추출 & DNA 전기영동

소개글

[아주대-생물학실험] (결과) DNA의 구조 및 추출 & DNA 전기영동에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험목적
2. 실험이론
　-DNA
　-퓨린류
　-피리미딘류
　-원핵생물
　-플라스미드
　-플라스미드 분리
　-원심분리기
원심분리기는
　-아가로스
3. 실험준비물
　1)소모성 재료
　2)기기
4. 실험방법
　1)Plasmid mini prep kit을 이용한 정제
　2)아가로스 젤 만들기
　3)전기영동
　3)DNA 확인
5. 실험결과
6. 고찰

본문내용

응(주반응과 동시에 제한된 비율내에서 일어나는 다른 반응을 말하는데 이 결과 주반응의 생성물은 이 부반응의 생성물을 불순물로서 함유할 가능성이 있음.)을 일으킬 수 있다고 한다. 그러므로 에탄올이 완전히 빠져나올 수 있도록 원심분리를 더 오래 해주는 것이다. 마지막으로 DNA를 녹여 빠져나오게 하기 위해 Elution buffer를 중앙에 넣어준다. 벽에 대고 넣어줄 경우 내부와 섞이지 못할 수도 있기 때문에 중앙에 직접 넣어주는 것 같다. DNA를 추출해내는 과정을 간단하게 요약하자면 DNA의 뉴클레오티드는 음전하의 인산기()를 가지고 있기 때문에 기본적으로 산성을 띄고 있다. 두 번째 과정에서 넣어준 S2 buffer의 염기성분이 이를 중성화 시키면서 DNA는 긴 실타래가 되는 것이며 그로 인해 필터에 걸릴 수 있는 것이다.(책에는 Neutralization solution이라는 중성화 용액을 넣었다.) 또한 원심분리기를 많이 사용했는데 이번에 쓰인 원심분리기는 여러 가지 원심분리 종류 중 속도침강 원심분리로 밀도기울기를 이용한 원심분리를 이용한 것 같다. 속도침강 원심분리는 시료를 많은 시간을 들여 원심분리 하게 되면 모든 입자가 바닥에 가라앉을 수 있기 때문에 저속에서 시간을 짧게 하는 것이 특징이고, 크기가 확실한 단백질, RNA, 리보좀 등의 분리에 이상적으로 활용된다고 한다.(책에 쓰인 내용과 다르게 거의 모든 원심분리를 1분 내외로 하였다.) DNA 전기영동에 대한 결과를 살펴보면 순서대로 1kb ladder buffer ~ 6조의 결과가 나와있다. ladder buffer는 단순히 DNA의 길이를 비교하기 위한 기준이 되는 물질이다. marker에는 특정길이의 DNA 조각들이 들어있어서 sample DNA의 길이를 가늠하는데 사용하는 것이 목적이다. 앞서 적어놓은 것처럼 DNA는 음전하를 가지고 있기 때문에 전압을 걸어주게 되면 음극은 밀어내고 양극은 끌어당기게 된다. 그리고 DNA의 크기가 크면 클수록 인산기가 더 많을 것이고 전하량은 그만큼 더 상승하기 때문에 크기가 중요한 요인으로 작용한다. 결과적으로 DNA의 분자크기, 꼬인 정도 및 아가로스 농도등에 의해 이동속도가 다르게 됨으로써 같은 위치에 어떤 것들이 겹치게 되는지 그리고 이것을 보고 시료들의 유전자 성분이 얼마나 비슷한지 그리고 자신이 뽑은 DNA가 맞는지를 알아볼 수 있게 되는 것이다.또한 밝기의 차이도 관찰할 수 있는데 그것은 농도에 따른 색깔 비율이라고 볼 수 있다. 더 밝을수록 DNA가 더 많이 관찰됐다는 뜻으로 해석할 수 있다. 그리고 DNA의 물리적 형태가 다양하기 때문에(supercoiled, nicked, linear 등) ladder marker와 같이 이동속도에 따라 여러개의 band가 나오게 되는데 상단을 보면 희미하게 band를 확인할 수 있다.
참고문헌
네이버 지식백과
네이버 이미지
「일반 생물학 실험」「남석현, 민철기」
http://blog.naver.com/bsi1223?Redirect=Log&logNo=90097291791

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