[일반생물학] Gram [그람]염색에 의한 미생물의 동정

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[일반생물학] Gram [그람]염색에 의한 미생물의 동정에 대한 보고서 자료입니다.

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Gram 염색 과정을 하나씩 살펴보면 먼저 세균을 증류수 위에 푼 후 가열하여 고정을 시킨다. 그리고 CV로 약 30초간 염색을 하는데 CV염색은 일차 염색이라고 하며 Gram 양성균의 경우 세포벽에 있는 마그네슘 리보뉴클레아제라는 산성 물질과 염기성인 CV와 결합하여 자주색을 띠게 된다. 다음 증류수로 세척한 후 iodine용액을 넣는다. Iodine은 일종의 매염제로 CV와 결합하여 불용성화합물인 Crystal Violet iodine complex를 형성하여 세포를 더욱 강하게 고정시키며 짙은 자주색을 띠게 해준다. 즉 Gram 양성균은 세포벽의 Mg-RNA-CVI complex가 형성되어 CVI complex보다 더욱 강한 결합을 갖게 해준다. 다음 증류수로 세척한 후 에탄올로 탈색을 시킨다. 이 과정은 매우 중요한데 그 이유는 충분히 탈색을 시키지 않으면 Gram 음성균이라도 Gram 양성균으로 보이는 오류가 나타나기 때문이다. 하지만 너무 오랫동안 탈색을 하면 고정된 균이 씻겨나가기에 주의해야 한다. 다음으로는 Safranin 사프라닌: 홍색~자홍색의 염기성 염료. N-페닐페나딘의 유도체 (네이버 백과사전)
으로 1분간 염색을 한다. 그리고 증류수로 세척하여 관찰을 하면 된다. 이 때, Gram 음성균이 붉은 염색이 되는 원리를 자세히 알아보면 Gram 염색 과정에서 두꺼운 펩티도글리칸 층에 의해 강력하게 유지되는 양성균의 Mg-RNA-CVI complex과는 달리 알코올 세척 시 외피가 파괴되어 펩티도글리칸 층의 구멍으로 CV가 모두 빠져나가기 때문에 나중에 Safranin에 의해 붉게 염색이 되는 것이었다. 이 원리를 이용하여 Bacillus cereus, Escherichi
a coli, Staphylococcus aureus를 관찰하였고 Ⅴ와 같은 결과가 나왔다.
위의 염색 방법 및 원리로 원핵 세포로 구성되어 있는 세균을 빠른 시간 내에 Gram 양성인지, 음성인지 확인할 수 있고, 더 나아가 현미경을 통해 모양을 보고 이 균이 어떤 균의 집단에 속하는지 알 수 있었다.
Ⅶ. 참고문헌
- 일반생물학 및 실험 실험서, 서울시립대학교 교양교직부 생물실험실, p34-39
- 네이버 지식사전 (그람염색법) - http://chani07.tistory.com/35
- 네이버블로그, http://blog.naver.com/go3952?Redirect=Log&logNo=80066938193

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일반생물학,   Gram ,   그람,   염색,   미생물