E L I S A

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E L I S A에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

: OD값
구해진 추세선의 식에 Unknown sample의 보정 OD값을 넣어 계산하면
Y=17.45437 x 0.9506 - 4.019 = 12.573124
320000 / 12.573124 = 25451.11
Unknown sample의 titer는 “1:25451.11”이다.
Ⅴ. Discussion.
이번 EILSA 실험의 경우 여러 단계에 걸쳐 간접적으로 측정했다. 따라서 실험과정에서 정확한 값에서 벗어날 가능성이 높을 거라고 생각한다. skim milk blocking이 잘못되어 Ab의 non-specific binding이 일어난다거나, skim milk의 제거가 제대로 되지 않아 Ab농도가 더 희석된다거나 하는 문제를 생각해볼 수 있다. 이번 실험에서는 우리가 수행한 것으로는 결과가 이상적으로 나오지 않았다. 그리고 처음 plate에 OVA를 coating할 때 어째서 pH 9.5 OVA solution을 이용했는가하는 이유를 살펴보겠다. 우리가 사용한 plate는 polystyrene으로 만들어졌으며 일반적으로 양전하를 띠는 성질이 있다. OVA는 단백질이므로 pH 환경에 따라 전하가 바뀔 수 있다. pH 9.5는 상당한 염기성 환경이므로, pH 9.5 solution에서 OVA는 염기성형, 즉 negative charge를 띤 형태로 바뀌게 된다. 따라서 pH 9.5 solution을 쓰는 이유는 양전하를 띠는 polystyrene 위로의 antigen의 coating을 돕기 위해서이다. Skim milk를 사용한 이유에 대해 살펴보자. Skim milk는 지방을 뺀 우유다. 이것을 PBS에 섞어서 Antigen의 표면을 coating해주는데, 이는 blocking을 위해서 쓴다. 즉, 우리가 원하지 않는 곳에 Conjugated Antibody가 붙는 것을 막기 위해 일종의 보호장치로 사용하는 것이다. 지방을 뺀 우유를 사용하는 이유는 지방이 nonspecific binding을 많이 하기 때문이다. 따라서 지방이 포함된 우유를 쓰면 Conjugated antibody가 붙어야 하는 Antigen의 epitope에 지방이 붙어 antigen의 농도를 희석시키고 실험의 오차를 발생시킬 수 있기 때문이다.
Ⅵ. References
1. Abul K. Abbas, Cellular and Molecular Immunology 7/ed., 2011, Elsevier.
2. Wikipedia.

키워드

ELISA,   생화학,   미생물학