혈액학 - Hematocrit 측정, 혈색소 측정, 실험과정, 오차의 원인, 적혈구 수 계산 (Red Blood Cell Count), 실험소감

목차

(1) Hematocrit 측정
(2) 혈색소 측정
- 실험과정
★ 오차의 원인
3) 적혈구 수 계산 (Red Blood Cell Count)
★ 오차의 원인
- 실험소감

본문내용

ocrit기로 원심분리를 해보니 혈장과 혈구로 나눠졌다.
정말 신기했다. 그리고 microhematocrit reader기로 직접 읽어
보니 정말 재미있었다.
(2) 혈색소 측정
< 분광광도계법(spectrophotometry)>
Cyanmethemoglobin법 (ICSH 표준법)
- 목적 : 혈색소 검사방법에 따른 각 검사방법의 원리 이해,
Cyanmethemoglobin법 (ICSH 표준법)검사방법에 대하여 그 원리와 검사방법을 설명 할 수 있어야한다.
혈색소 표준검량선을 작성할 수 있어야한다.
→ 빈혈검사
- 원리
Cyanmethemoglobin법의원리
Hgb(Fe2+)
Methemoglobin(Fe3+)
Cyanmethemoglobin
( 540 nm 에서 흡광도를 측정 )
- 실험과정
5.0ml의 Drabkin액을 4부 시험관에 넣는다.
Sahli pipette 또는 micropipette로 잘 혼합한 EDTA 혈액 또 는 capillary blood를 흡입하여 넣는다. 이때 pipette 외부에 묻
은 혈액을 거즈로 닦고 희석액이 담긴 시험관에 넣고 3~4회 희석 액으로 pipette 내부에 묻은 혈액을 씻어 넣는다. 희석액과 잘 혼 합시킨다.
10분간 실온에 방치하여 발색시킨다.
희석액 5,0ml를 맹검으로 하여 540nm 파장으로 흡광도(눈금0), 또는 투과율(눈금100%)을 맞춘 후 측정한다.
흡광도 또는 투과율을 구하여 검량선에서 Hbmshd도(g/dl)를 구 한다.
- 실험결과
Hemoglobin 측정용 검량선 그래프 첨부
- 정상 참고치(혈색소 농도)
성인남자:13-18gm/dL
성인여자:12-16gm/dL
임산부:11-12gm/dL
신생아:17-19gm/dL
소아:14-17gm/dL
test tube : 16.7g/dl
1번째 tube : 15g/dl
2번째 tube : 7.5g/dl
3번째 tube : 5g/dl
- 실험결과 해석 및 오차의 원인
검량선 그래프 첨부
그래프를 그려보니 16.2g/dl
5조 결과 (흡광도//혈색소농도)
test tube : 0.41 // 16.7g/dl
1번째 tube : 0.39 // 15g/dl
2번째 tube : 0.21 // 7.5g/dl
3번째 tube : 0.14 // 5g/dl
오차 : 16.7-16.2 = 0.5
★ 오차의 원인
부정확한 Sahli pipette를 사용했을 때(±1% 이내 것을 사용)
충분히 혼합되지 못했을 때
충분히 방치 하지 않았을 때
희석액이 잘못 조제되었을 때
희석액이 오래되어서 퇴색되었을 때
Calibration curve를 자주 검정하지 않았을 때
Cuvette이나 pipette가 깨끗하지 못했을 때
정색시약을 얼렸을 때
- 실험 소감
임상화학시간에 화면으로만 봤던 기구인 Sahli pipette과
micropipette을 직접 사용해보니 재미있고 신기했다.
진짜 병원에서 실습하는 기분이 들었다.
3) 적혈구 수 계산 (Red Blood Cell Count)
- 목적 : 혈구의 기능과 참고치 범위에 대하여 알고 수기 혈구 계산법
으로 각종 체액의 세포들도 계산하고 혈구계산방법들에서 나
타날 수 있는 혈구 수의 오차 범위와 그 원인을 알아 보기 위해서
- 원리 : 혈액1㎕(㎟) 중에 있는 적혈구 수를 세는 방법으로 현미경
으로 직접 중구획에 있는 적혈구 수를 count해서 계산한뒤
구하는 방법이다.
- 실험과정
RBC pipette에 정확히 0.5mark까지 EDTA 혈액이나 손가락끝 천자 혈액을 채운다.
Pipette 외부에 묻은 혈액을 닦고 손끝으로 0.5mark까지
정확히 조절하고 즉시 희석액을 101mark까지 정확히 채운다.
Pipette bulb안에 기포가 생기지 않도록 천천히 흡입한다.
3분간 혼합한다.
Pipette 모세에 관부위혼합되지 않은 부분을 배출하기 위해 처음
3방울을 버린다.
Chamber에 cover glass를 밀착시킨 후 양쪽 계산실에 넣는다.
혈구들을 안정시키기 위해 3분간 방치한다.
저배율렌즈로 중앙의 대구획(1mm²)에 초점을 맞춰서 RBC의 분
포가 고르게 퍼져있는 가를 확인한 후 고배율(400X)렌즈로 돌려서
계산수칙을 지키면서 5개의 중구회 내의 RBC수를 센다.
한 중구획씩 따로따로 세어 편차를 확인해 보면서 진행하면 더욱
효과적이다. 다른 한쪽의 계산실도 같은 방법으로 계수하여 평균치
를 내면 오차를 줄일 수 있는 방법이 된다.
- 실험결과
179 X 12.5 X 10 = 4,475,000
179 : 계산식 양쪽 평균 RBC의 수
12.5 : 두 칸을 count했으니 25/2
10 : 179 X 12.5는 0.1㎕속의 적혈구수이기 때문에 x10
200 : 혈액+생리식염수를 한 희석배수
- 정상 참고치
유아 : 4.8~7.0X1012/L
어린이 : 3.8~5.4X1012/L
성인 남자 : 4.5~5.5(평균 5.0)X1012/L
성인 여자 : 4.0~5.0(평균 4.5)X1012/L
- 실험결과 해석 및 오차원인
: 실험대상이 된 적혈구수는 4.79x10/㎕ 였다.
4.79x10개의 5%는 239500개 인데
4,790,000-4,475,000 = 315000 그러므로 5%안에 들지않는다.
★ 오차의 원인
검사하는 사람의 숙면 미숙으로 인해 희석이 부정확 했을 때
기구나 희석액이 오염이 되었을 때
조작이 너무 늦어 혈구가 일부 응고될 때(모세혈관 사용시)
Counting 수칙을 지키지 않았을 때
RBC가 고르게 퍼져있지 않았을 때(계산실 오염의 원인이 많다)
계산실에 넣은 액이 넘치거나 기포가 생겼을 때
젖은 pipette이나 끝이 부러진 pipette로 사용했을 때
Pipette 외부에 묻은 혈액을 닦지 않고 희석액을 넣었을 때
희석액을 처음 3방울 버리지 않았을 때
- 실험소감
우리 몸 속에 있는 적혈구를 직접 피를 빼 실험을 해서 적혈구 수를 세어보니 정말 신기했다. 처음에 100배로 했을 땐 너무 흐릿하고
작아서 잘 보이지 않았는데 400배로 하니 정말 선명하게 잘보였다.
다음에 기회가 된다면 내 피의 적혈구 수도 한번 세어 보고싶다.

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혈액학,   혈색소,   실험,   적혈구 수 계산,   Hematocrit 측정