chromatography에 대하여 실험의 모든것 정리

소개글

chromatography에 대하여 실험의 모든것 정리에 대한 보고서 자료입니다.

목차

１．Chromatography의　어원

２．Chromatography의　역사

３．Chromatography란？

４．Chromatography의　분리원리

５．Chromatography

６．Chromatography의　분류
　　Ⅰ．TLC(Thin-Layer Chromatography)
　　Ⅱ. HPLC
　　Ⅲ . GC

7. Reference

본문내용

는 것이다. 기체 시료를 주입시킬 때는 gas tight syringe나 gas-pass sample loops를 사용한다.
액체 시료는 syringe로 주입시킨다.
고체시료는 분석하려는 시료에 방해되지 않는 용매에 녹인 용액을 주입하는데 최근 고체의 직접 주입을 위해 고안된 장치가 상업적으로 유용화되고 있다. 기체와 액체를 주입할 때는 self-sealing septum을 통해 hypodermic syringe needle을 사용하여 주입하고 syringe로부터 주입된 부피를 측정한다.
⑶column
column tubing은 copper, stainless steel, aluminum, glass 등을 사용하여 직선형, 굽은 형, coil형으로 만들어진다. copper는 반응을 일으키거나 흡수를 일으키는 어떤 시료 성분에는 사용하기 어렵다. 일반적인 칼럼은 stainless column이 쓰인다.
높은 온도에서 작동시킬 때에는 직선형 칼럼이 훨씬 효율적이지만 장해가 생기게 되어 coil형으로 감거나 적당히 구부려 만든다. 컬럼 길이는 수 inch에서 50 feet 이상으로 변화시킬 수 있는데 보통 분석에 사용되는 컬럼은 3-10feet이다. 길이가 길어지면 이론 단층수가 커지고 분해능이 좋아진다. 그런 신 컬럼을 쓰면 inlet pressure가 높아야 하는데 고압은 시료 주입 기술과 기체가 새는 것을 막는데 문제점이 있다.
시료 주입용량은 액상의 양이 많으면 많을수록 커지므로 김 컬럼에는 많은 양의 시료를 주입하여 분리할 수 있다. 컬럼 직경은 작으면 작을수록 컬럼 효율은 커진다.
⑷solid support(고체지지체)
고체지지체는 액상을 분리하는데 넓고 균일하고 비활성인 표면을 제공한다.
　지지체의 성질은 다음과 같아야 한다.
①비활성일 것
②crush strength가 클 것
③표면적이 클 것
④일반적인 모양과 균일한 크기를 가질 것
⑸stationary phase(고정상)
　이론적으로 액상은 다음과 같은 성질을 가져야 한다.
①시료는 각기 다른 분배 계수를 나타내야 한다.
②시료는 액상에 합당한 용해도가 있어야 한다.
③액상은 조작 온도에서 무시할 수 있을 만한 증기압을 가져야 한다.
GLC에서는 사용되는 partitioning solvent를 올바르게 선택하는 것이 가장 중요하다.
GLC에서 다양성과 선택성은 액상의 선택에 달려 있다.
⑹temperature
GC에서는 주입부, 컬럼, 검출기의 세 부분의 온도를 각기 조절해야 한다.
①주입부 온도
주입부는 시료가 빠르게 기화되어 주입 기술로부터 유발되는 효능도의 손실을 없애기 위해 충분히 뜨거워야 하는 반면 열 분해 혹은 rearrangement를 막을 수 있을 만큼 낮아야 한다. 만일 컬럼 효능도나 peak 모양이 넓어지면 주입 온도가 너무 낮은 것이고, 지연시간, 면적, 모양이 급격히 변하면 온도가 너무 높아서 분해나 rearrangement가 일어난 것이다.
②컬럼 온도
컬럼온도는 분석이 알맞은 시간에 끝날 수 있을 만큼 충분히 높아야 하고, 원하는 분리가 일어날 수 있을 정도로 낮아야 한다. Giggings가 만든 간단한 어림법에 의하면 컬럼 온도가 25-30도씩 낮아짐에 따라 지연 시간은 2배가 된다. 대부분 시료의 경우 컬럼조작온도가 낮으면 낮을수록 고정상에서 분배 계수의 비가 커지고 분리가 잘된다. 비점 범위가 넓은 시료의 경우에는 낮은 조작온도를 사용하지 않고 온도 프로그래밍이 필요하게 된다.
③검출기 온도
검출기에서의 온도의 영향은 사용되는 검출기의 종류에 따라서 다르다. 일반적인 규칙에 의하면 컬럼출구에서 검출기로의 연결 부위에서 시료나 액상의 응축이 일어나지 않도록 충분히 뜨거워야 한다. 응축이 일어나면 peak가 넓어지고 성분 peak가 없어진다. 열전도 검출기에서 감도와 안정도는 검출기 온도 조절의 안정도에 의존한다. 이온화 형태의 검출기에서는 온도조절은 결정적인 것은 아니다. 단지 시료가 응결되거나 이온화 과정에서 형성되는 부산물이나 물이 응결되는 것을 막을 수 있을 정도의 고온으로 유지되어야 한다.
⑺detectors (검출기)
검출기는 컬럼유출물 중에 들어있는 성분들의 존재를 나타내주고 그 양을 측정한다. 검출기의 바람직한 특성들로는 높은 감도, 낮은 noise level, 넓은 범위에 걸친 감응도의 직선성, 여러 가지 형태의 화합물에 대한 균일한 감응도 및 견고성 등을 들 수 있다. 또한 운반 기체나 온도변화에 의한 영향이 적어야 하며, 값이 싸야 한다. 어떤 검출기도 이러한 모든 요구를 만족시키지는 못하나 열전도도 검출기(Thermal conductivity Detector, TCD)와 불꽃 이온화 검출기(Flame Ionization Detector, FID)가 가장 많이 쓰이는 일반적 검출기이다.
４. 응　용
현재는 크로마토그래피가 색소의 분리뿐만 아니라 금속 이온의 검출, 단백질의 성분 검출, 아미노산의 분리 등에 다양하게 이용되고 있다.
최근에 운동 선수들이 경기 중에 일시적으로 강한 힘을 발휘하기 위하여 경기를 시작하기 전에 금지된 약물을 복용하는 일이 가끔 있다.
도핑 콘트롤 센터는 선수들이 약물을 복용했는지를 검사하기 위해 설치된 기관으로, 경기를 마 친 선수로부터 소변을 받아 그림과 같은 장치로 몸 속에 약물이 들어 있는지를 검사한다. 이와 같은 장치는 크로마토그래피의 원리를 이용한 것이다.
특히 한국 과학 기술 연구소의 도핑 콘트롤 센터는 1988년 서울 올림픽에서 금메달을 딴 육상 선수의 약물 복용 사실을 밝혀내어 금메달을 취소시킴으로써 한국 과학 기술의 우수성을 세계 에 과시하였다.
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7. Reference
⑴기체　크로마토그래피－기초이론과　고분리능　GC실험기술，김경례　저，자유아카데미
⑵실험생화학，한국생화학회　저，탐구당
⑶액체 크로마토그래피의 원리와 응용， 노경호　저，인하대학교출판부
⑷기기분석의　원리와　응용，박면용　외，녹문당
⑸Lehninger - Principles of Biochemistry 3rd

키워드

chromatography,   크로마토그래피,   tlc,   hplc,   생화학,   gc,   전개용매,   실리카