단백질 전기영동

목차

introduction
method
discussion

본문내용

ynamic range에 있어서 색을 이용한 방법과 reverse 염색 방법 보다 우수하다.
Nile Red 염료는 Coomassie Blue보다 좀 더 민감하지만 빛에 대한 불안정성 때문에 이미지 분석을 이용한 단백질 정량 분석에는 사용하기가 어렵다.
SYPRO Red, SYPRO Orange, SYPRO Tangerine 염료는 단일 단계 염색 방법으로 destaining없이 편리하게 30-60분 안에 완전히 끝낼 수 있다. 세가지 염료 모두300nm에서 여기되기 때문에 일반적인 UV transilluminator로 젤 사진을 만들 수 있고 CCD 카메라가 장착된 image analysis workstation 혹은 laser scanners도 이용할 수 있다. SYPRO Red와, SYPRO Orange는 염색 시약에 7% acetic acid를 첨가해야 하는데, 이러한 유기 용매가 electroblotting, electroeluting, 혹은 단백질 활성 측정시에 문제가 된다. 반면에 SYPRO Tangerine는 유기 용매가 필요하지 않고 다양한 buffer를 사용될 수 있다. SYPRO Ruby 염료는 특허 ruthenium-based metal chelate stain이며 은 염색 방법과 비슷한 민감성을 가지고 있다. 한 단계로 염색이 가능하고 background staining이 적으며 linear dynamic range가 은이나 Coomassie blue 염색 방법보다 1000배 정도 높다. 또한 20% 이상 더 많은 단백질을 염색할 수 있고 재현성에 있어서도 우수하다. peptide mass profiling 방법으로 소량의 단백질을 동정할 수 있어서 SYPRO Ruby는 proteomics에 이용하기 좋은 염색 방법이다.
⑤ 화학 발광 염색 방법 (Chemiluminescence-based staining methods)
화학 발광법을 이용하면 평균적인 양의 cysteine을 가지고 있는 단백질 10ng 정도를 검출할 수 있고 이는 collodial Coomassie Blue 염색에 의한 민감성과 비슷하다. 최근에는 젤 상에서 항원을 직접적으로 검출하는 방법이 개발되었다.
⑥ Immobilized pH gradient/MALDI-TOF mass spectrometry and surface-enhanced laser desorption-ionization mass spectrometry (SELDI-MS)
MALDI-TOF mass spectrometry-based surface scanning에 의한 단백질의 laser desorption은 picomolar 단위까지 검출이 가능하다. 그러나 2D 젤 상에서의 baseline slope 변화에 따른 horizontal streak, 단백질 복합체에 의한 artifact, 예상보다 큰 단백질 질량 등의 문제점들을 고려해야 한다. SELDI는 solid-phase chromaographic surface (ProteinChip Array)에 단백질을 고정시킬 수 있으며 고정된 단백질을 TOF-MS를 이용해서 검출할 수 있어 빠르게 시료에 대한 정보를 분석할 수 있지만 SELDI에 의한 단백질 동정에 대해서는 아직까지 이의가 제기되고 있다.
5. References
molecular ell biology 로디쉬,버크,시퍼스키,마쓰다라,다넬 4th, p.87
life 생명 - 생물의 과학 (6th Edition),Purves, Sadava,Orians,Heller, 2003년p.36,p.41
http://www.cheric.org/ippage/e/ipdata/2001/12/file

키워드

단백질,   sdspage,   runninggel