동물세포 계대배양(subculture)

소개글

동물세포 계대배양(subculture)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1)Title 동물세포 계대배양(subculture)

2)Date

3)Purpose

4)Introduction
♦Trypsin 설명과 사진
♦EDTA 설명
♦HeLa Cell 설명과 사진

5) Materials 준비물

6) 실제 실험실에서 사용되는 동물세포계대배양 프로토콜(protocol)

7) Result
♦관찰기록표
♦성장곡선(growth curve)
♦trypsin처리전과 처리후 세포모양사진
♦관찰일지

8) Discussion 실험조교들이 자주 물어보는 요소들 설명, 주의사항, 실험tip 등

9) Reference

본문내용

로부터 완전하게 회수하여야만 한다. 모든 세포가 trypsin 감수성이 똑같고 똑같이 dish로부터 떨어져 나온다면 별 문제가 없겠지만, 동일한 세포주(cell line)라고 개개의 cell에 따라 다소의 trypsin 감수성에 차이가 있고, 동일하게 세포가 떨어져 나오지 않는 경우도 있게 된다. 강하게 기벽에 접착된 세포를 회수하지 않은 상태에서 장기간 계대조작을 하게 된다면 그 세포주의 세포집단을 변화시키는 위험성에 놓이게 된다.
HeLa cell은 trypsin을 처리하기전 길다랗고 날씬한 모양을 관찰 할 수 있었다. 그 후 trypsin 처리 뒤 동그란 모양을 관찰 하였다. 계대배양을 한 다음날 관찰한 결과 세포의 모양이 다시 처음처럼 길다랗게 변한 것을 볼 수 있었다. 계대배양 뒤 5일동안 매일 세포를 관찰하여 증식곡선을 그려 보았다. Y축에는 dish내의 HeLa cell의 %를, X축엔 배양일수를 기준으로, 5일동안 평균세포수를 %를 찍어 각 점에 대해 직선을 그었다. 5일동안 한 개의 HeLa cell로부터 분열하여 증식을 꾸준히 하는 것으로 보아 이 기간은 대수증식기(logarithmic growth period)기간으로 생각 된다. 다른 조원들의 세포 dish를 관찰시 마지막날인 10월 4일경 세포가 죽어가는 사멸기에 접어든 것을 관찰 하였다. 사멸기에 든 세포는 마치 trypsin을 처리 한 것 처럼 둥글고 현미경 관찰시 배지내를 둥둥 떠다니는 것을 관찰 하였다. 배지의 색 역시 노란색을 띠고 있어 pH가 상승하고 영양분이 고갈되었음을 알 수 있었다. HeLa cell은 암세포주로서 무한한 분열능력을 가진 세포이지만 이런 세포라도 적당한 배지내의 영양, pH, 적당온도 등이 맞아야지만 살아갈 수 있다는 것을 알 수 있다.
9) Reference
세포공학개론, Murakami외 1명, 경문사, 1997, p108~117
조직배양, 김승업, 민음사, 1994, p65~78
신경조직배양, 김승업, 민음사, 1996, p73~80
General techniques of cell culture, Mauree A. Harrison외 1명, CAMBRIDGE, 1996, p69~88
Culture of animal cells, R.Ian Freshney, WILEY, 199~216
세포배양노트, 정출이헌, 월드사이언스, 1998, p63~76, 115~143
http://microscopy.org

키워드

세포배양,   계대배양,   cell,   cell line,   증식곡선,   동물세포계대배양