정제된 단백질의 SDS-PAGE 분석: Western blotting

소개글

정제된 단백질의 SDS-PAGE 분석: Western blotting에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Date
　
2. Subject
　
3. Object
　
4. Introduction
　① Western blotting
　② 단백질 membrane의 전사와 Ponceau S 염색
　③ Membrane transfer의 원리
　④ 막(membrane matrix)의 종류 및 특징
　
5. Materials & Apparatus
　※ Gel-membrane sandwich 제작
　※ Ponceau S
　
6. Methods
　※ 주의사항
　
7. Results
　
8. Discussion
　
9. Reference
　

본문내용

1. Date
　28 April 2006
2. Subject
　정제된 단백질의 SDS-PAGE 분석
3. Object
　정제된 단백질의 SDS-PAGE를 분석하기 위한 방법인 western blotting에 대한 지식을 익힌다. 단백질을 membrane으로 전사하기 위한 kit제작 방법을 배운 다음 gel transfer를 하여, 단백질을 membrane으로 전사한다. 마지막으로 ponceau S 용액으로 단백질의 발현 유무를 확인한다.
4. Introduction
　① Western blotting
　전기영동 기술은 생체 용액에 있는 개개의 단백질 성분을 분리하는데 기본적인 기술이었다. 종이나 전분(starch), agarose 등이 단단하고, 반응성이 없으며, 대류성이 없어서 전기 영동 기술에 많이 이용되었으나 현재는 polyacrylamide가 전기영동의 대부분에 이용되고 있다. 그러나 이 재료의 우수성만으로는 특정 단백질의 검출에는 이용할 수 없다. 1979년 Towbin은 전기영동 시킨 polyacrylamide gel로부터 무수한 구멍이 있는 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 단백질의 항체 검출하는 방법을 고안하였다.　Blotting은 SDS-PAGE에 의해 분리된 단백질들을 모세관 작용 혹은 전기영동상에 의해 분리 젤로부터 지지막(supporting membrane)으로 옮기는 과정을 말한다. 이렇게 하면 gel 내에서 분리되어 있던 거대 분자가 막에 이동되어 똑같은 복제판을 가지는 지지막을 얻을 수 있다. 이렇게 옮기는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. 여기에 표지 항체를 결합시켜 지지막 상의 단백질의 위치를 확인할 수 있기 때문에 단백질의 크기와 양에 대한 정보를 알게 된다. 이와 같은 방법으로 단백질이 공유 변형을 일으켰는지 알 수 있다. 즉 phosphotyrosine에 반응하는 항체를 표지 하여 막에 고정시키면 phosphotyrosine 여부를 확인할 수 있다.

키워드

SDS-PAGE,   Western blot,   단백질 정제,   분리정제,   Ponceau S,   Gel-membrane sandwich