재조합단백질의 발현과 정제

목차

대장균에 의한 융합단백질의 발현과 정제

Baculovirus · 곤충세포계에서의 재조합 단백질의 발현과 정제

동물세포에서의 유전자 재조합 단백질의 발현

무세포 단백질 합성

본문내용

단백질 발현을 성공시키기 위한
중요 포인트
전체단백질에서의 목적 단백질 비율이 높게하라.
적당한 promoter와 supressor를 갖는 vector선택
Promoter에 가장 적합한 host cell을 선택
(protease 유전자가 결손된 host cell)
배양조건 & 발현유도조건 검토
His tag 단백질의 발현과 정제
His tag 특징
모든 숙주에서 발현가능
짧은 배열의 부가
임의의 vector로 자작 가능
부가에 따른 활성과 입체구조에의 영향 적다
Insoluble로 되고 Inclusion body를 만드는 경우가 많다
특이항체가 복수의 회사에서 입수가능
정제에 필요한 cost가 싸다
변성제의 존재하에서 Tag에 의한 정제가능
Column에 결합한채로 refold로 결합
온화한 환원제 존재하에 정제가능

키워드

His tag,   GST fusion protein,   Inclusion body purification,   transfection,   affinity chromatography