Gel Filtration을 이용한 molecular weight 결정

소개글

Gel Filtration을 이용한 molecular weight 결정에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험제목

2. 실험날짜

3. 제출자 및 공동실험자

4. 실험목적

5. 실험원리

6. 시약 및 기자재

7. 실험방법

8. 결과

9. 고찰

10. 참고문헌

11. Further study

본문내용

의 경우 결과에도 썼듯이 미지시료의 molecular weight를 10.814KDa이 나왔다.
10. 참고문헌
1) 한국생화학회 (1999) 실험생화학, 탐구당, 서울
2) 생화학실험(1) 전반기 (2004)
3) Biochemistry, Stryer 외, Freeman
11. 문제
1) , 와 관계에서 다음과 같이 를 정의할 수 있다.
이 때 0<<1가 되는 이유와 이 가 의미하는 것은?
☞ 에서 는 상수값이다. 가 의미하는 것은 total volume에서 void volume을 뺀 것, 즉 bead volume을 의미하는 것이기 때문에 colume 안에 bead를 한 번 packing하면 그 값이 변하지 않기 때문에 는 상수값이 된다. 그렇기 때문에 의 값은 에 의해 결정 된다. 가 0일 때는 물질이 너무 커서 바로 분리되어 나올 때를 말하며, 이 때는 가 된다. 가 0과 1사이일 때는 가 되며 이 때는 protein의 크기에 따라 bead에 들어갈 수 있는 것이 있고 없는 것이 있게 된다. 가 1일 때에는 protein이 너무 작아서 colume에 오래 머물러 있을 때로 이 때는 가 된다. 그러므로 는 분배계수로써 을 의미한다. 즉 molecular weight이 작을수록 단백질은 gel을 통과하는 시간이 길어져서 가 크게 나오게 된다. 가 크게 나오면 그것에 비례하여 의 값도 크게 나오게 된다. 그러므로 값이 크면 molecular weight이 작다는 것을 알 수 있다.
2) gel filtration chromatography에서 분자량을 결정할 수 있다면 어떻게 가능한가?
☞ 그림 2.와 같은 graph를 만든 뒤 추세선을 이용하여 1차 곡선인 y=ax+b의 형태를 얻고 이것을 이용하여 molecular weight을 구할 수 있다. 여기에서 y는 logM.W가 되고 x는 가 되기 때문에 sample 측정을 통해 안 logM.W와 을 이용하여 a와 b값을 쉽게 구 할 수 있고, 미지시료의 값을 구한 뒤 y=ax+b의 식에 대입해서 logM.W값을 구할 수 있고 log값을 계산하면 미지시료의 molecular weight을 구할 수 있다.
3) blue dextran은 분자량이 2,000,000 Da이다. 앞의 실험에서 blue dextran이 용출되는 volume과 사이의 관계는?
☞ Blue dextran은 2000KDa이기 때문에 colume안의 bead에 전혀 들어갈 수 없고 그냥 흘러 나오게 된다. 그러므로 blue dextran이 elution된 volume이 void volume과 일치하게 된다.
12. Further study
1) Cytochrome c의 경우 410nm에서 흡광도를 재는데 그 이유는 무엇인가?
☞ Cytochrome c는 그 구조 안에 heme structure를 많이 가지고 있다. 이런 heme 구조는 aromatic ring을 많이 가지고 있는데 이 aromatic ring은 빛을 더 많이 흡수하기 때문에 410nm에서 cytochrome c의 흡광정도를 더 잘 관찰 할 수 있다.

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