Agarose Gel Electrophoresis(아가로스겔전기영동)

소개글

Agarose Gel Electrophoresis(아가로스겔전기영동)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1.실험이론

2.실험기구&시약

3.실험방법

본문내용

buffer
● 10X TBE 1L :
Tris 107.81g(0.89M) + EDTA 2.44g(0.02M) +Boric acid 55.0g(0.89M) + H2O (up to 1L)
⑤ sample DNA
⑥ EtBr (ethidium bromide) 용액
EtBr은 molecular work에서 가장 많이 가장 빈번히 사용되고 가장 위험한 물질이다. 이것은 uv에 노출되면 형광색으로 발광하며 DNA와 매우 친화력이 크다. DNA는 ATGC가 서로 일정한 암호로 배열되어 있는 화학물질이며 생명암호 전달물질인데, EtBr은 이 DNA가 이중 나선을 이루었을 때 나타나는 하나의 밴드와 비슷하게 생겼다. 이를테면, A와 T 또는 G와 C가 결합한 모양과 비슷하다는 말이다. Ethidium bromide은 얇은 판 모양으로 생겼으며, 이중나선을 한 DNA 염기서열의 사이사 이에 껴 들어가길 좋아하고, 마치 하나의 염기서열마냥 남아 있게 된다. 그렇게 되면 그 세포가 분열 시에 그 EtBr은 일종의 flame shift mutation이 일어나게 되는데 이것이 바로 암이 되는데 꽤 강력한 발암물질이다. 그렇기 때문에 이 용액을 취급할 때는 주위를 요한다.
⑦ Electrophoresis kit
3. 실험 방법
① 1% agarose gel을 준비한다.
0.5X TAE 50ml에 0.5 g을 넣고 끓인 후, 틀에 붓고 30분간 굳힌다.
② DNA 용액 10ul에 6X loading dye 2ul를 섞어 gel에 loading 한다.
lane 1 : Size marker
lane 2-n : DNA
③ 전기영동 100V, 40분
④ EtBr 용액에 gel을 20분간 담궈 염색(staining)한다.
⑤ gel을 수돗물에 15분감 담궈 탈색(destaining)한다.
⑥ gel UV transilluminator 위에 올려놓고 DNA가 잘 분리 되었는지
확인한다.
⑦ 사진을 찍어 보관한다.
4. 실험 시 주의 사항
전기영동에 사용되는 몇 가지 화학물질은 몸에 몹시 좋지 않으므로 사용에 주의해야한다. DNA와 RNA를 염색하는데 주로 사용되는 EtBr (Ethidium Bromide)은 돌연변이원이면서 발암물질이므로 사용 시 항상 비닐장갑을 착용하고, 사용 후에 이 용액은 정화한 후 버려야 한다.
또한 전기영동 장치는 고압의 전기를 발생시키는 경우가 많으므로 항상 감전의 위험을 배제하도록 주의를 기울여야 한다.

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