액체크로마토그래피-HPLC에의한카페인분석-5

목차

ABSTRACT

INTRODUCTION

DATA AND RESULT

DISCUSSION

REFERENCE

본문내용

농도가 변할 때마다 조금씩 변하였다. 이에 따라 Standard curve의 기울기도 일정하지 못해서 흡광도-농도 그래프가 정확한 일직선 형태로 나타나지 않았다.
이러한 오차가 일어난 원인으로는 우선 측정오차가 있을 것이다. 용액의 흡광도(A)를 측정할 때 필연적으로 측정오차가 발생할 것이다. 이때에는 비록 사소한 수치상의 차이일 수 있으나, 이 실험엣 용액의 농도 스케일이 매우 작으므로 몰 흡광계수를 구할 때 비교적 큰 오차를 발생하는 요인으로 작용할 수 있다. 그 다음으로는 희석시킬 때도 필연적으로 측정오차가 발생할 수밖에 없다. 비록 사소한 오차라도 농도 스케일이 작을 때는 큰 오차를 야기하는 원인이 될 수 있음을 유념하자.
덧붙여 Beer-Lambert 법칙이 맞지 않는 경우도 있음을 알아둘 필요가 있다. Beer 법칙은 대부분의 묽은 용액 (<0.01M)에 대해 아주 잘 맞는다. 이 실험에서 사용한 용액의 농도는 모두 0.01M 이하이므로 Beer의 법칙이 이상적으로 적용될 것이다. 따라서 Beer의 법칙이 잘 맞지 않아서 오차가 발생했다고 결론짓는 것은 무리가 있다. 그러나 Beer의 법칙이 항상 성립하는 것은 아니라는 것을 짚고 넘어갈 필요가 있다.
용액이 더욱 진해지면, 용질 분자들은 가까이 있기 때문에 서로 영향을 미치기 시작한다. 한 용질이 다른 용질과 상호작용을 하면 각각의 전기적 성질들(빛의 흡수를 포함)은 변화하려고 한다. 겉으로 나타나는 결과는 농도-흡광도 그래프가 더 이상 직선을 이루지 않는다는 점이다. 극단적인 경우에 있어서 대단히 높은 농도의 용질은 용매가 된다. 분명히 서로 다른 용매 중에서 분자의 전기적 성질들이 같게 되는 것을 기대할 수는 없다. 때로는 용액 중에서 빛을 흡수하지 않는 용질들은 흡수화학종과 상호작용을 하며, 겉보기 흡광계수를 변화시킨다.
[실험 2]에서 역상크로마토그래피를 이용하여 색소를 분리했을 때, 1차 분리 액에 색소 Y만 분리되어 나온 것이 아니라 색소 B가 섞여있었다. 색소를 정확하고 정밀하게 분리하기 위해서는 plunger를 일정한 압력으로 밀어줘야 할 것 같다. 갑자기 높은 압력이 작용하게 되면 시료-고정상, 시료-이동상 사이의 상호작용 차이에 의해 분리되기 보다는, 높은 압력에 의해 다량의 시료가 한꺼번에 밀려서 용출될 수 있기 때문이다. 그러나 실제로 plunger가 뻑뻑해서 일정한 압력으로 밀어주기가 힘들었다. 때문에 이 부분에서 가장 큰 오차가 발생한 것으로 추정된다.
[실험 2]에서 회수율을 계산했을 때 용액 B, Y 각각 115%, 113%로 나타나서 약 15%, 13%의 오차율을 보였다. 즉 이론상으로 분리되어야할 색소의 양보다 많이 분리된 것이다. 이 같은 오차는 앞서 언급했듯이 plunger의 압력을 일정하게 유지하지 못해서 발생한 것일 수도 있고, 1차 분리를 멈춰야 할 색소가 컬럼에서 모두 사라질 때까지만 이루어져야하는데, 이를 정확히 알기가 매우 어렵다. 따라서 보다 정확한 값을 원한다면 같은 실험을 여러 번하여 그 평균값을 구하는 방법이 있을 것이다. 마찬가지로 2차 분리에서 파란색 색소를 분리하는데 필요량보다 많은 양의 에탄올을 사용하였거나 혹은 필요량보다 적은 양의 에탄올의 사용한 것도 오차의 원인이 될 수 있다.
REFERENCE
① 김택제, 명승운, 조현우, 김명수, 「실용적인 기체·액체크로마토그래피와 질량분석법」, 자유아카데미, 2002, p.189~216
② 김강진·김하석·이대운·이원역, 「분석화학」, 자유아카데미, 1993, p.524~542, 704~712
③ 응용화학실험법 편찬위원회, 「응용화학실험법」, 단국대학교 출판부, 2002, p.267~274

키워드

액체,   크로마토그래피,   HPLC,   카페인,   분석