[기초유전학실험]6.DNA의 제한효소 처리 및 전기영동

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

것이다. 그리고 vector의 경우, 전기영동 사진은 uncut사진과 cut사진의 비교가 필수적이다. 이는 uncut plasmid DNA가 Nicked , Linear, Covalently Bonded, Supercoiled, Circular single stranded 등 다양한 형태로 존재 할 수 있다. 하지만 uncut plasmid에서 Linear의 형태로만 존재할 수도 있기 때문에 제한효소 처리 후에도 절단되지 않았지만 전기영동 사진에서는 Linear의 형태로 나올 수 있기 때문이다.
실험에 대한 기타 보충설명
① 제한효소를 사용할 때 하나만 사용하면 잘라진 부위가 다시 붙을 가능성이 높다. 따라서 되도록 두 종류의 제한효소를 사용한다.
② 제한효소 사용 시, 서로 다른 제한효소가 각각 다른 buffer에서 활성을 갖는다면 제한효소 2개가 공통으로 갖는 buffer를 사용하도록 한다. (공통 buffer는 제한효소를 만든 산업체에서 나온 매뉴얼의 표를 참조하도록 한다.)
③ 같은 buffer의 사용도 중요하지만 같은 온도의 활성화는 더욱 중요하다. buffer는 서로 달라도 맞출 수 있지만, 온도의 경우 둘이 꼭 같아야 하기 때문이다.
④ 실질적으로 vector는 크기가 커서 제한효소에 의해 잘 절단되지만 insert는 크기가 작아서 vector에 비해 잘 절단되지 않는다. (vector 5677bp, insert 474bp) 따라서 insert의 제한효소 처리 시간을 더 주어야 한다.
⑤ Total volume 설정 시에는, D.W를 넣으면 희석이 되는 셈이므로 D.W를 최대한 안 넣을 수 있게끔 total volume을 만들도록 한다.
⑥ MCS에 있는 두 개의 효소인식부위(NdeⅠ,NheⅠ)를 이용하면 NdeⅠ, NheⅠ를 가진 외부 DNA를 클로닝할 수 있다. 이러한 방향성 클로닝은 외부 DNA를 벡터 안에 뒤집혀 들어갈 염려를 할 필요 없이 한쪽 방향으로 들어가도록 할 수 있다.
6. Reference
유전학의 이해 . Robert H.Tamarin 저. 전상학 외 역. 라이프사이언스 2003
분자생물학(2판). Robert F.Weaver 저. 박상대 역. 라이프사이언스 2003
최신 유전학. D. Peter Snustad, Michael J. Simmons 저. 김상구 역. 범한서적 2002
실험날짜
학 번
이 름
담당교수님
http://www.bioneer.co.kr/

키워드

제한,   기초유전학실험,   제한효소 처리 ,   전기영동,   DNA