영양생화학실험A+) SDS-PAGE 및 western blot

소개글

영양생화학실험A+) SDS-PAGE 및 western blot에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

영양 생화학 실험


1. 주제 SDS-PAGE & Western blot
2.
재료
및

기구 기구 1) SDS-PAGE

Sample( 9개 - control군, curcumin 저농도 및 고농도 처리군)
Glass plates (short plate, tall plate) , casting frame , casting stand, 3M paper,
전기영동 tank, pipette (1000ul, 200ul, 20ul), power supplyer,
kims wiper, conical tube, e.p tube, vortex, slicon glove, racker, thermobath,

2) Western blot

Transfer kit (N.C paper, sponge, 3M paper, transfer buffer, ice pack, blocking buffer), wrap, cassette, X-ray film, kims wiper, conical tube, e.p tube, vortex, slicon glove, racker, thermobath,

시약 1) SDS-PAGE

Separating gel component, stacking gel component, running buffer, 6x SDS loadingdye, protein marker

2) Western blot

Primary antibody(c-jun), Secondary antibody(rabbit), ECL solution, PBST, developer solution, fixer solution, blocking buffer (skim milk 5% in PBST), trasfer buffer

3.
실험 목적

및
원리 목적 SDS-PAGE 에 의한 단백질 분리 및 Western blot
원리
1) SDS – PAGE (Sodium dodecylsulfate – Polyacylamide Gel Electrophoresis)

SDS-PAGE는 단백질의 순도 검정이나, 단백질 분리, 단백질 분자량 측정 등을 위해 실행하는 기법이다. 분석하고자 하는 단백질 시료에 SDS나 β-mercaptoethanol 등을 가하면 강력히 변성되는 동시에 (–) charge로 하전 된다. 일정하게 하전 된 단백질 시료는 polyacylamide을 지지체로 하여 전기장을 이용하면 분자량에 따라 gel의 분자 걸름 효과와 전하의 효과에 의해 gel상에 분리된다. 작은 분자량 일수록 빨리 이동하기 때문에 분자량 marker와 비교함으로써 분자량의 추정이 가능해진다. SDS-PAGE는 분리능이 우수하여 western blot 또는 2차원 전기이동(2D)에 이용할 수 있다.


2) Western blot

Western blotting은 SDS-PAGE를 행한 후, 단백질을 membrane에 전사하는 기법으로, 목적하는 단백질의 존재 여부, 위치, 양 등을 확인하기 위해 항체를 이용해 특정 단백질을 검출하는 방법이다.
SDS-PAGE에 의해 gel상에 크기 별로 분리된 단백질을 membrane (nitrocellulose paper)으로 전기이동 시킨 후 항원-항체 반응을 이용하여 특정 단백질에 비특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 단백질을 검출한다.

키워드

SDS-PAGE,   SDS,   웨스턴블롯,   western blot