Spectrofluorometry (형광분석법) (예비보고서)

소개글

Spectrofluorometry (형광분석법) (예비보고서)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3. 시약 및 기구
4. 실험 방법

본문내용

더 셀에 지문이 묻지 않도록 하는 것이 중요한데 이는 피부기름이 종종 형광을 내기 때문이다.
② Measurement example
: 시료 중의 형광물질에 의하여 방출된 형광강도는 시료 중의 형광물질의 농도와 비례한다. 그러므로 위의 식 (6) F = Kc 에서 비례상수 K 에 영향을 미치는 요인에는 앞에서도 설명한 바와 같이 몰흡광계수, 양자수율, 시료의 단면적, 입사광선의 강도 등이 있다. 하지만 형광물질을 정량 분석하는데 있어서 이 비례상수에 대한 구체적인 지식은 반드시 필요한 것이 아니기 때문에 구체적으로 알려고 할 필요가 없다. 다만 우리는 흡광 광도법에서와 같이 표준용액을 조제, 주어진 조건하에서 표준용액의 형광강도를 측정, 표준 검량선 작성, 표준 검량선에서 시료의 형광강도 비교, 그리고 계산의 과정을 통하여 시료 중의 형광물질을 정량분석 할 수 있다. 형광광도계를 이용하여 형광물질을 정량분석 할 때에는 표준 검량선을 작성하기 위한 여러 가지 농도를 지니는 표준용액을 조제한 후, 이 중에서 가장 높은 농도를 지니는 용액과 공시료(blank test)를 이용하여 형광광도계가 최대의 수치(100)와 0을 읽도록 보정하여야 한다. 그러므로 모든 시료용액은 0과 최대점(100)사이에서 형광광도가 측정되어 진다. 가장 높은 농도를 지니는 표준용액이 지시기의 최대 수치(100)를 읽도록 조절하는 것은 흡광단색화장치의 entrance slit의 개폐정도를 조절하여 시료를 들뜨게 하는 흡수광(입사광)의 강도를 증가시키기 위한 것이다. 그러므로 이와 같은 조작은 위 식에서 나타난 바와 같이 형광강도에 영향을 미치는 변수 중의 하나를 조절하는 것이다.
- example
3. 시약 및 기구
1) Reagents
○ 0.05 M Na2HPO4
(Disodium phosphate or Sodium hydrogen phosphate)
Properties of Na2HPO4
white crystalline solid
Molar mass
141.96 g/mol
Density
0.5~1.2 g/cm3
Melting point
250 oC
Solubility in water
7.7 g/100 ml (20 oC)
- Preparation of 0.05 M Na2HPO4 solution 500 mL
= 3.549 g
○ Disodiumfluorescein (Uranine)
(Fluorescein(C20H12O5) Uranine, Fluorescein disodium salt)
Properties
Fluorescein
Uranine
Molar mass
332.306 g/mol
376.27 g/mol
Melting point
314~316 ℃
320 ℃
Solubility in water
slightly, insoluble
500 g/L(20 ℃), soluble
Appearance
yellowish-red, crystalline powder
orange-red, crystalline powder
- The fluorescence of fluorescein
형광성이 매우 높으며 494 nm에서 excitation이 일어나고 521 nm에서 emission이 일어난다. pKa = 6.4 이고, 이의 ionization equilibrium은 5~9의 범위에서 pH-dependent absorption과 emission을 유발한다.
○ Distilled water (증류수)
2) Instruments
○ Cuvette (Sample cell)
○ Pipette, Spuit
○ Beaker, Volumetric flask (500 mL, 100 mL)
○ Chemical balance, Parchment paper, Spatula
○ Spectrofluorometer
Model : FP 750
Light source : Xe lamp
Detector : Silicon photodiode for excitation monochromator photomultiplier for emission monochromator
Monochromator : Holographic grating with 1200 grooves/mm modified Rowland mount
Wavelength range : Zero order - 200 ~ 1000 nm for both excitation and emission monochromators
4. 실험 방법
Preparation of sample solutions
① 0.05 M Na2HPO4 solution을 이용하여 1 mg/ml의 uranine을 녹인다.
② 10 ㎍/ml uranine 용액 (①의 용액을 1/100으로 희석시킨다)
③ 0.1 ㎍/ml uranine 용액 (②의 용액을 1/100으로 희석시킨다)
* 용액은 항상 실험 직전에 희석하고, 용액이 충분히 잘 섞은 후 희석시킨다.
* 빛에 민감하므로 어두운 곳에 보관한다.
* 용액을 희석시킬 때는 반드시 증류수가 아닌 0.05 M Na2HPO4 용액을 사용해야 한다.
Spectra Measurement
① 형광분석기 ON (주의! 110V) - 10분간 Warm-up
② 10분 후, Computer On , Spectra Manager 실행
③ Spectra Measurement 실행
④ [Measurement] → [Parameter] → 설정
⑤ 먼저 0.05 M Na2HPO4 을 Cell에 넣고, Auto Zero를 잡아준다.
⑥ Sample을 Cell에 넣고 Start
- Sample을 Cell에 넣기 전에 증류수로 5번 이상 씻어낸 후 드라이기로
깨끗이 건조시킨 뒤 사용
⑦ PL측정이 끝나면 Spectra Analysis가 나온다.
- [File]에서 이름을 바꾼다.
⑧ [Processing] → [Peak Processing] → [Peak Find] 실행
⑨ Spectrum 위에 나오는 bar를 원하는 peak에 고정시키고 Add를 누르면 list에 peak 정보가 들어간다.
⑩ data나 spectrum을 출력하거나 저장한다.
⑪ 형광분석기 OFF
⑫ Computer OFF

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