[A+] Transformation 예비레포트

소개글

[A+] Transformation 예비레포트에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목적
4. 실험 이론
5. 기구 및 시약
6. 실험 방법
7. 참고 문헌

본문내용

in dimethylformamide
6. 실험 방법
6-1) ALB plate 만들기
① 아래 나와있는 조성과 같이 중량을 달아 내용물 부피의 4~5배 큰 용기에 담는다. (LB Medium20g/L, Agar15g/L, Deionized water1L* 액체 LB배지를 만들 경우에는 agar를 빼고 나머지는 동일하게 첨가하여 만든다.) (LB medium 4g, Agar 3g, DW 200mL)
② 뚜껑이 있는 용기일 경우에는 살짝 닫고, 플라스크와 같이 뚜껑이 없는 경우에는 알루미늄 호 일로 입구를 막는다.
③ autoclave에 넣고 증기멸균을 시킨다. (120℃, 20min)
④ 뜨겁지 않을 정도로 식으면 ampicillin을 넣는다. 최종 농도는 50㎍/L 가 (200 ㎕/200 mL)되도 록 첨가해 주고 잘 섞는다.
⑤ 멸균petri dish에 부어서 식힌다. 이 과정은 배지가 다른 균에 의해서 오염되지 않도록 하기위 해서 clean bench에서 하며 70% 에탄올로 실험 테이블을 깨끗이 닦고, 알콜램프를 켜고 램프 주 위에서 해야 한다.
⑥ 굳은 후 접시를 뒤집어서 살짝 열어 놓고 습기를 제거한다.
6-2) Transformation
① 클린벤치를 UV로 멸균시켜 놓는다.
② competent cell(JM109)을 꺼내서 얼음에서 5분간 녹인다.(쓰기 직전에 꺼내고 냉동보관)
③ 1.5ml 튜브에 competent cell (JM109) 50㎕를 넣는다.(s-5,6,7,8,nc, pc), (100 ㎕ for cc)
④ ligation이 된 DNA 샘플2㎕를 넣는다. (손으로 톡톡, centrifuge 안됨)
⑤ 얼음에 30min 둔다.
⑥ heating block에서 42℃로 50sec 동안 cell을 heat-shocking 한다.(주의: 60s 넘기지 말것).
⑦ 바로 얼음에 2분간 둔다.
⑧ LB(no ampicillin) 950㎕ 첨가 후 2회 정도 inverting 해 준다. (cc의 경우 900 ㎕)
⑨ 1시간 30분 동안 37℃에서 incubation한다.
⑩ Ampicillin 넣은 ALB plate에 X-Gal을 도말해 X-ALB를 준비한다.
⑪ incubation 한 튜브를 13,000rpm으로 1min centrifuge시키고, 상등액을 버린다.(600㎕정도)
⑫ 상등액을 버리고 남은 것들을 pipeting 하여 X-ALB plate에 도말한다.
⑬ Plate를 뒤집은 상태에서 37℃ incubator에 overnight 시킨다.
⑭ Plate 상에 colony 형성을 관찰하고 경우에 따라 배양시간을 조절 후, 4 ℃로 냉장보관한다. - IPTG (100㎕/plate), X-Gal (20㎕/plate)
7. 참고 문헌
미생물학백과DNA [deoxyribonucleic acid] https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5144868&cid=61232&categoryId=61232
분자세포생물학백과 형질전환 [Transformation] https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5569117&cid=61233&categoryId=61233
미생물학백과 형질전환 [transformation] https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5144996&cid=61232&categoryId=61232
생화학백과 오페론 [operon]
https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5733423&cid=60266&categoryId=60266
생명과학대사전 수용성 세포 [competent cell, 水溶性細胞] (, 초판 2008., 개정판 2014., 강영희)
화학물질 구조사전, “IPTG” https://terms.naver.com/entry.naver?docId=4502453&cid=60228&categoryId=60228
화학백과, “ampicillin” https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5663072&cid=62802&categoryId=62802
분자세포생물학백과 컴피턴트 세포
https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5930278&cid=61233&categoryId=61233
[네이버 지식백과] 그리피스의 실험 [Fred Griffith\'s Experiment ] (분자·세포생물학백과)
그리피스의 실험 (naver.com)
[네이버 지식백과] 컴피턴트 세포 [Competent cell] (분자·세포생물학백과)
https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5930278&cid=61233&categoryId=61233
[네이버 지식백과] 형질전환 방법 [transformation method] (미생물학백과 )
https://terms.naver.com/entry.naver?docId=6212170&cid=61232&categoryId=61232
[네이버 지식백과] [colony] (두산백과 )
https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1166544&cid=40942&categoryId=32330
Dawin Bio “white-blue screening”
https://dawinbio.com/gendepot/?q=YToxOntzOjEyOiJrZXl3b3JkX3R5cGUiO3M6MzoiYWxsIjt9&bmode=view&idx=3745611&t=board
[네이버 지식백과] 암피실린 [ampicillin] (화학백과)
https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5663072&cid=62802&categoryId=62802
[농림 축산 검역 본부] 암피실린 분자식, 분자량
file:///C:/Users/82103/Downloads/%EC%9C%84%ED%95%B4%ED%94%84%EB%A1%9C%ED%8C%8C%EC%9D%BC-%EC%95%94%ED%94%BC%EC%8B%A4%EB%A6%B0.pdf

키워드

Transformation,   실험예비레포트,   실험보고서