[이화여대 생명과학실험3 분반1등 A+ 레포트] Purification of Plasmid DNA by Mini-prep

소개글

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목차

I. 실험 목표

II. Introduction
1. Plasmid DNA Transformation
① What is Plasmid DNA?
② Plasmid DNA Transformation
2. Mini-prep (Plasmid DNA Purification)

III. Materials & Methods
1. 실험 도구 (Materials)
2. 실험 방법 (Methods)

IV. Results
1. Concentration of Plasmid DNA
2. Absorbance of Plasmid DNA

V. Discussion
1. Interpreting Nanodrop Result
2. 정리

VI. References

본문내용

I. 실험 목표
Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. 본 실험은 다양한 실험에 필요한 plasmid DNA만을 얻는 mini-prep 실험을 진행하고, nanodrop 기기를 통해 정제한 plasmid DNA sample의 순도를 측정하는 것을 목표로 한다.

II. Introduction
1. Plasmid DNA Transformation
① What is Plasmid DNA?
Plasmid DNA는 bacterial cell 내에서 관찰되는 세포 소기관으로, main DNA와는 별개로 존재하는 원형의 DNA이다. 크기가 매우 작아 보통 30개 이하의 적은 유전자를 지닌다. Plasmid DNA가 생존에 필수적인 유전자를 지니고 있는 것은 아니나, host에게 여러 이점을 제공한다. 예를 들어, E. coli 내 존재하는 R plasmid(Resistance plasmid)는 ampicillin 분해 효소에 대한 유전자가 존재하기 때문에 bacteria의 생존에 큰 도움을 준다. 이러한 plasmid DNA는 host cell 당 적게는 1~3개, 많게는 수십 개까지 복제되기도 한다.
② Plasmid DNA Transformation
Transformation(형질전환)은 특정 DNA 절편을 생명의 유전체 내로 삽입해서 새로운 유전 형질이 발현되도록 하는 방법이다. 주로 bacteria에서 자주 관찰되는 현상이며, 외래 DNA가 bacteria 내부로 삽입됨으로써 발생한다. 이 외래 DNA 중 한 가닥은 분해되고 나머지 가닥만 cytoplasm으로 들어간다. 이때 bacteria의 DNA에 새로 삽입된 외가닥 DNA와 비슷한 서열이 존재한다면, RecA 효소에 의하여 recombination이 일어난다. 이렇게 recombination이 일어난 DNA가 세포 분열을 하면, 원래의 DNA를 가진 한 세포와 transformation 된 DNA를 가진 또 하나의 세포가 만들어진다.

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