중합효소 연쇄 반응

목차

■ PCR의 원리

■ PCR의 방법

■ PCR의 시료

■ PCR의 혼합물

■ PCR CYCLE

■ PCR 이용 및 응용

■ PRIMER

본문내용

다.
증폭될 DNA단편은 길이상 약 3kb보다 더 크지 않아야 하며 이상적인 길이는 1kb미만이다. 10kb이상의 단편들이 표준 PCR기술들에 의해 증폭될 수는 있지만 더 긴 단편일수록 증폭 효율은 더 낮고, 안정적인 결과를 얻기가 어려워진다.
그러면 Primer는 얼마나 길어야 하는가? Primer가 너무 짧으면 다른 유사한 염기서열을 가진non-target site와 결합을 이루게 되어 원하지 않는 증폭산물을 생산할 것이다. 이를 설명하기 위해, total human DNA가 8 nucleotide길이의 primer(8-mer, 8bp) 한 쌍과 함께 PCR실험에 사용된다고 상상해 보자. 어떤 8 nucleotide 서열이 한번 정도 나타날 수 있는 가능한 길이는 48=65,536bp이다. 즉 65,536bp길이의 DNA상에 어떤 8 nucleotide와 같거나 상보적인 서열을 갖는 부위가 한 곳 정도 존재할 가능성이 있다는 것이다. Human genome은 3,000,000kb정도이며 여기에 8 nucleotide가 match할 수 있는 부위는 대략적으로 46,000곳 정도나 된다. 이것은 한 쌍의 8-mer primer는 human DNA에 대해 단일의 특이적인 증폭산물을 생산할 수 없다는 것을 의미하는 것이다.
17-mer primer가 사용되는 경우는 어떠한가? 17-mer sequence의 예상되는 빈도수는 417
=17,179,869,184bp이다. 이러한 수치는 human genome의 길이보다 5배 이상 더 긴 것이다. 17-mer primer는 total human DNA에서 단 하나의 혼성화 부위를 갖는다고 예상할 수 있다. 따라서 한 쌍의 17-mer primer는 단일의 특이적인 증폭산물을 생산할 것이다. 왜 간단하게 가능한 한 긴 primer를 만들지 않는가? 그 이유는 primer의 길이는 그것이 주형 DNA와 혼성화를 이루는 속도에 영향을 주기 때문이다. 더 긴 primer일 수록 더 느린 속도로 혼성화를 이룬다. 따라서 실험동안 생산된 증폭된 분자의 수에 의해 추정되는 PCR의 효율은 primer가 너무 길 경우 감소하게 된다. 이 경우 주형분자와의 완전한 혼성화는 reaction cycle동안 허용된 시간내에 일어날 수 없다.
목 차
■ PCR의 원리
■ PCR의 방법
■ PCR의 시료
■ PCR의 혼합물
■ PCR CYCLE
■ PCR 이용 및 응용
■ PRIMER

키워드

중합효소,   pcr,   dna