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PCR 정의
캐리 멀리스(Kary B. Mullis)에 의하여 1985년에 개발된 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR)은 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에 사용하고 있는 검사법으로, 검출을 원하는 특정 표적 유전물질을 증폭하는 방
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sample을 0.5 ml PCR tube에 준비한다.
- 각 tube에 PCR program[94℃ 2분, (94℃ 30초, 55℃30초, 72℃ 30초: 5 cycle), (94℃ 30초, 60℃ 30초, 72℃ 30초 : 20 cycle), 72℃ 5분]에 의한 PCR을 진행한다.
- 전기영동으로 결과를 확인한다.
Results
↑ Chromosomal DNA isolation of E.coli
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RT(reverse transcriptase) PCR이란?
RT-PCR이란 P.Seeburg(1986)에 의해 RNA를 찾고 분석하는데 도입된 방법으로 mRNA(messenger RNA)로부터 reverse transcription 과정을 통해 얻어진 cDNA(complementary DNA)를 PCR로 증폭하는 방법이다. 이러한 방법은 RNA 검사의 sensitivity를
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는 4개의 ds DNA가 있다. 30 cycle을 반복 후 개의 ds DNA가 존재하게 된다. PCR을 통해서 DNA를 증폭시켜서 많은 DNA를 얻어서 전기영동에 로딩하여 눈으로 확인할 수 있다. PCR은 온도조절이 정밀한 PCR 기계에서 수행하는데, 이 기계는 여러 사이클을
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것을 전제로 하나 primer 자신이 hair pin 구조를 형성해 버리면 목적 유전자에 결합할 수 없거나 다른 유전자와 결합해 버려 false positive의 원인이 되는 경우가 있다.
다행히 PCR 반응 중에는 열에 의한 변성 과정이 존재하여 그 과정에서 hair pin 구
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