[줄기세포] SCT 시험노트정리

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본문내용

결합하는 Site가 있지만, 고등생물은 SD Sequence가 없다. 따라서 5‘ to 5’ Structure가 mRNA를 인식하는 특수한 구조가 되는 것이다.
※ Polio virus는 eIF4G(Adaptor)의 N-terminal을 제거하여 eIF4E와의 결합을 방해하고, 결국 eIF4E에 의한 Cap 인식이 억제되어, Translation이 일어나지 못하게된다. 하지만 Virus는 Cap이 없어도, IRESs구조를 통해서 Ribosome에 결합하여, Translation이 가능하므로, 유전자 발현이 된다.
-> Cap 구조의 중요성
Polyadenylation이 일어나는데, CstF와 CPSF에 의해 RNA가 잘라지고, Poly A Polymerase(PAP)가 Polyadenylation하게 된다. PAB는 Seq가 분해되지 않도록 안정화 시켜준다.
결과적으로 mRNA는 5‘ Capping,
3’ Polyadenylation을 통해 mature mRNA가된다.
CTD : Carboxy Terminal Domain
Polymerase II에만 있는 이 Tail은 Serine의 인산화에 따라서, RNA Polymerase의 기능이 달라진다. 또한 CTD에 붙어있던 Capping enzyme이 mRNA 전사가 시작되는 동시에 붙어서 Capping을 하고, splicing machinery가 붙어 Splicing을 일으키고, Polyadenylation and Cleavage Factor가 연속적으로 Polyadenylation 하게된다.
=> 전사가 되는 동시에 수선과정이 일어남.
SCT - 3
◎ RNA Polymerase Structures
1) Structure
① Multi Subunits
RNA Pol I : 14개 Subunits
RNA Pol II : 12개 Subunits
RNA Pol III : 16개 Subunits
RNA Pol 모두 공통되는 Subunit(ABC)도 있으며, (이는 공통의 기원으로부터 진화해왔다는 증거가 될 수 있다.)
Polymerase가 여러개의 Subunit이 있다는 것은 구조가 조금씩 변화함에따라 기능이 달라질수있기 때문에, 하나의 Polymerase가 다양한 기능을 갖는다는 것이다.
②Homolous sequences between RNA polymerase
RNA Polymerase끼리 Seq구조가 매우 유사한데,
a : DNA binding
d, f : tx elongation
g : RNA binding
RNA Polymerase II는 유일하게 CTD구조를 가지며, CTD의 인산화에따라 Polymerase의 기능이 달라진다.
※ Bacteria는 αα‘ββ’ Subunit의 간단한 구조로
완전히 Surface to Surface 접촉을 하고있다.
※ DNA Polymerase는 RNA Polymerase와 달리 RNA Primer를 필요하다는 것이 가장 큰 차이점이다.
③ Non Specific binding to DNA
Prokaryote이든 Eukaryote이든 어떤 DNA든지 Non-specific하게 Binding해야하고, Specificity는 Transcription Factor에 의해서 생긴다.
Specificity 결정
Pro : Sigma Factor
Eu : Transcription Factor가 형성하는 3차원적 구조
④ CTD
(YSPTSPT) 26 Repeats in yeast and 50 Repeats in mammals
YSPTSPT의 각 OH기가 얼마나 인산화되는가에 따라서 기능이 달라진다.
위 TF(TFII A~ H)
TFII H ① CTD Kinase Activity
② Helicase Activity
1) TFII E가 결합하면 TFII H의 Kinase Activity가 활성화 되고, CTD가 인산화된다.
2) CTD가 인산화되고, TFII E가 떨어져나가면, TFII H의 Helicase activity가 활성화되어, Promoter Clearence가 가능해진다.
CTD Phosphorylation의 영향력
① Capping Enzyme
② Processing Enzyme
② Termination Factor
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2) RNA polymerase in MTC or Chloroplast
MTC와 Chloroplast는 진화단계에서 공생해서 들어온, Bacteria 기원이기때문에, 자체적으로 갖고있는 Polymerase Gene이 발현되어, Bacteria RNA Polymerase와 유사한 RNA Pol을 갖고있다.
◎ Assay system for Eukaryotic tx
① oocyte system
② Transfection system
③ Transgenic system
④ in vitro system
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▶ oocyte system (X.laevis oocyte)
- 생체 system의 필요에따라 개구리의 미수정된 난자를 사용하여 유전자의 표현을 보는 것이다.
- 난자 특유의 환경때문에, 유전자 표현에 변화가 있을수있는 한계점이 있다.
▶ Transfection system
우리가 원하는 Target cell을 Tissue culture한다음 그 동물세포에 직접, DNA를 넣어주는 방법
Ca2+ dependence cell을 많이 이용한다.
Tranfection은 Transformation시에 Virus Vector DNA를 사용하여 주입하기 때문에, Virus Vector는 별도의 Packaging cell을 이용해서 Virus를 infection 시키기때문에, Transfection이라하며, Virus를 쓰지않을때도 Transfection이라한다.
① Transient expression assay
-넣어준 DNA가 DNA Integretion되지 않았을때, 유전자가 살아있을동안 Cytoplasm에서의 표현을 보는것.
② Stable expression assay
넣어준 DNA가 핵안으로 들어가서 DNA Integretion

키워드

진핵세포,   전사조절,   RNA Polymerase,   프로모터,   전사인자,   Enhancer,   Chromatin remodeling,   유전자발현,   mRNA가공,   일반화학/분자생물학