생균수측정실험보고서

소개글

생균수측정실험보고서에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 재료

3. 실험 방법
(1) 희석하기
(2) 평판배지에 옮기기

4. 결과
◆ 총균수 개수 ◆

5. 토론
◎기타방법과 보충
평판배양법(plate counting method)
membrane fillter법
세균을 직접 계수하는 방법
(가) 직접현미경법(direct microscopic count method)
(나) Bactoscan technique
세균의 활성도를 측정하는 방법
(가) Impedance method
(나) ATP method

본문내용

우에는 1cm 이내의 평균집락수에 65를 곱하여 그 평판의 집락수로 계산한다.
⑨ 전 평판에 30개 이하의 집락만을 얻었을 경우에는 가장 희석배수가 낮은 것을 측정하고 반드시 몇개 이하라고 보고한다.
⑩ 1 평판에 있어서의 집락수를 상당 희석배수로 곱하고 그 수치가 표준평판법에 있어서 1 ㎖ 중(1g 중)의 세균수 몇개라고 기재보고하며 동시에 배양온도를 기록한다.
⑪ 숫자는 높은 단위로부터 3단계를 4사5입하여 유효숫자를 2단계로 끊어 이하를 0으로 한 다.
◎기타방법과 보충
평판배양법(plate counting method)
시료 → 적당한 배수로 정확하게 희석 → 1㎖를 페트리 접시에 주입 → 미리 가열 용해하여 45。C 정도로 냉각한 한천배지를 주입,혼합,응고 → 평판배양 → 발생한 colony수를 계수
1개의 colony가 1개의 세포로부터 형성된 것으로 간주하여 colony의 수로부터 균액 중의 생균수를 산출
생균수측정의 가장 일반적인 방법
정확한 계수를 위해서 1개의 평판배양에서 colony수가 30～300개가 되도록 시료를 희석하여야 한다. 페트리 접시 대신 눈금이 있는 모세관을 이용한 모세관법(capillary tube method)도 있다.
colony 계수법의 주의사항
사용하는 배지조성에 따라서 발육하지 않는 균도 있으므로 배지의 선택에는 주의
pH, 배양온도, 배양시간 등의 배양조건도 계수하고자 하는 모든 균종에 대해서 충족되어야 한다.
membrane fillter법
시료 → 멸균 membrane fillter로 여과 → 한천평판배지나 배지를 적신 여지 위에 막을 밀착시켜 배양 → 형성된 colony수로부터 세포수 산출
최확수법(most probable number method, MPN법)
시료를 10배씩 여러 단계로 희석 → 각 단계의 일정량(예 : 1㎖)씩 배지가 들어있는 시험관 5개에 각각 접종 → 배양 → 희석단계별로 미생물이 생육한 시험관 수 산출 → MPN표에서 미생물 수를 추정
예를 들어 다음과 같은 결과가 얻어졌다면
희석배수 105 106 107
미생물이 생육한 시험관수 5 2 0
이 경우 MPN 표의 값은 49/100㎖ 이므로 시료 1㎖당 균수는 (49/100)×106 , 즉 4.9 × 105가 된다. 균농도가 묽은 경우에도 membrane fillter법과 함께 이용할 수 있다.
세균을 직접 계수하는 방법
(가) 직접현미경법(direct microscopic count method)
직접 현미경을 통하여 원액중의 미생물 수를 세는 방법으로 Breed에 의해 개 발되었고(Breed법), 슬라이드의 1㎠ 내에 원액 0.0l㎖를 도말건조시켜 염색 후 직접 세균수를 세고, 현미경 계수를 곱하여 원액 1ml중의 세균수를 산정한 다.
(나) Bactoscan technique
원액중의 미생물을 형광염색 물질로 염색하여 형광현미경을 통해 연속적으로 세균을 세는 자동화된 미생물 계수장치이다. 예를 들면, 40℃ 되게 처리한 원액를 lysing용 액으로 카제인과 체세포 등을 용해시켜 단백질 분해효소(proteolytic enzyme) 에 의해 분해시키고, 미생물은 acridine orange용액으로 염색 후 continuous flow epifluorescent 현미경에 의해 감지되어 박토스캔에 의해 계수된다. 이 기기는 시간당 80개 시료를 처리할 수 있고, 시료 1개의 검사시간은 약 15분이 소요된다(시료의 예열처리 10분 + Bactoscan 측정시간 5분).
세균의 활성도를 측정하는 방법
(가) Impedance method
Impedance란 전도물질에 흐르는 교류전류에 대한 저항을 말한다. Impedance method는 이 원리를 기초로하여 배지에 접종된 미생물의 대사산 물들로 인한 전기적인 impedance의 변화량을 측정하는 방법이다. Conductance는 저항의 역치이다. 이 원리를 이용한 기기로는 박토미터(Bactometer)와 맬더스(Malthus)가 있다. 표준평판배양법의 결과를 이 기기의 감지시 간(Detection time)과 관계시켜 두 방법간의 상관관계가 0.95 이상되게 보정 (calibration)하여 사용한다.
(나) ATP method
모든 생윤에 존재하는 ATP를 추출하여 생물발광성(bioluminescence)에 ATP 가 소모되는 원리를 이용하여 미생물 수를 측정하는 방법이다. 전제 조건으로는 세 포내 ATP 함량이 모든 종류의 미생물에서 동일해야만 품질 평가 방법으로 사용될 수 있다.

키워드

생균수측정실험보고서,   평판배양법,   membrane fillter,   직접현미경법,   Bactoscan technique,   Impedance method,   ATP method