blue-white selection

소개글

blue-white selection에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1) Plasmid의 구성
2) LacZ를 이용한 color selection

본문내용

색이 되고, DNA가 재조합된 박테리아의 conony는 LacZ가 망가져서 기능하지 않아 X-Gal이 그대로 남아 있어서 흰색 colony가 된다. 이렇게 색깔의 차이로 DNA가 plasmid 에 들어가서 세포 내에서 증폭되어 기능하는지 알 수가 있다.
그림에서 설명이 되듯이 plasmid에 들어가 있는 lacZ는 Lac operon의 일부이다. Lac operon은 너무 커서 plasmid에 다 넣으면 못쓰기 때문에 plasmid에서 작은 부분(alpha fragment)을 만들고, E. coli에서 나머지 부분(omega fragment)을 만들어 보완하면 완전한 beta galactosidase의 기능을 할 수 있게 된다. 이를 alpha complementation이라고 합니다. 사실, E. coli는 원래 beta galactosidase를 만들 수 있는 유전자를 가지고 있는 미생물이다. 그러므로 정상적인 균이라면 plasmid가 들어가지 않아도 blue colony를 형성해야 한다. 그래서 실험실에서 사용하는 균주는 거의가 Lac operon이 망가진, 위와 같이 omega fragment만을 만들 수 있는 mutant를 사용하는 것이다.

키워드

blue-white selection,   blue-white screening,   lac operon,   plasmid,   lacZ,   beta-galactosidase,   X-gal,   lactose