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비록 항생물질 저항성 유전자가 선택 표시제의 가장 편리한 유형이지만, 일부 플라스미드는 다른 체계를 이용한다. 한 중요한 예는 pUC8 이다. 그것은 앰피실린 저항성 유전자와 lacZ’ 라 불리는 유전자를 운반한다. 그리고 lacZ’ 는 β-갈락토
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푸른 색이 되고, DNA가 재조합된 박테리아의 conony는 LacZ가 망가져서 기능하지 않아 X-Gal이 그대로 남아 있어서 흰색 colony가 된다. 이렇게 색깔의 차이로 DNA가 plasmid 에 들어가서 세포 내에서 증폭되어 기능하는지 알 수가 있다.
그림에서 설명
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갈락토시다제는 젖당을 글루코스와 갈락토스로 가수분해한다. 알파-상보성은 특수배지에 파란색 집락의 존재로 알 수 있다. 이 파란색 집락은 플라스미드에서 생산된 lacZ\'가 대장균 염색체에 존재하는 염색체의 lacZ 유전자와 상보적인 절편
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끝에 A가 나와서 일반 평활말단 벡터에는 삽입이 되지 않는다. 따라서 이 PCR 증폭산물을 클로닝하기 위하여 개발된 것이 T-vector이다. 당연히 클로닝 부위는 T가 튀어나와서 PCR산물의 A와 결합되게 된다.
벡터에 GFP가 들어가면 lacZ\'가 부서지게
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LacZ를 이용한 color selection
LacZ를 이해하기 위해서는 Lac operon이란 것을 알아야 하며 이는 박테리아에서 시행되는 유전자 발현 조절 기구입니다. Lac operon은 E. coli가 lactose를 galactose와 glucose로 분해하는데 필요한 효소인 beta-galactosidase를 만드는
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LacZ gene이 존재한다. E. coli의 원래 genome에는 lac operon이 있다. operon의 operator에 repressor가 붙어 있어서 operator 앞부분의 promoter에 transcription factor가 작용하지 못하게 된다. 하지만 배지에 IPTG를 넣어주면, operator에 붙은 repressor와 결합하여 repressor
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