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균이라면 plasmid가 들어가지 않아도 blue colony를 형성해야 한다. 그래서 실험실에서 사용하는 균주는 거의가 Lac operon이 망가진, 위와 같이 omega fragment만을 만들 수 있는 mutant를 사용하는 것이다. 1) Plasmid의 구성
2) LacZ를 이용한 color selection
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selection
LacZ를 이해하기 위해서는 Lac operon이란 것을 알아야 하며 이는 박테리아에서 시행되는 유전자 발현 조절 기구입니다. Lac operon은 E. coli가 lactose를 galactose와 glucose로 분해하는데 필요한 효소인 beta-galactosidase를 만드는 유전자입니다.
Lacto
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selection
2. plasmid isolation
3.전기영동(Electrophoresis)에 의한 DNA분리
4. 제한효소 (restriction enzyme)
5. E.coli : transformaion
6. 접합(Conjugation)
7. Transduction 형질도입-> bacteriophage
8. PCR(Polymerase Chain Reaction)
9. RNA isolation / DEPC solution / 주의점
10. Protein expr
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Lac 유전자 앞 쪽에는 포도당 농도를 감지하여 반응하는 부위가 있다.
이러한 여러 유전자와 조절 부위들을 합쳐 Lac operon(락 오페론)이라 부른다. Lac 오페론은 자세하게 연구되었다.
조절 부위
기능
Operator (LacO) 작동부위
억제물질(repressor) 결
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r에 의하여 lac operon의 발현이 억제된다.
(2) corepressor라는 일반단백질이 존재하여 이는 는 repressor와 결합하여, repression을 도와준다.
4. 정리
세포내에 lactose의 존재시 이것이 inducer로 작용하여 repressor의 작용을 억제시켜 RNA polymerase 가 결합할 수
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lac operon이 있다. operon의 operator에 repressor가 붙어 있어서 operator 앞부분의 promoter에 transcription factor가 작용하지 못하게 된다. 하지만 배지에 IPTG를 넣어주면, operator에 붙은 repressor와 결합하여 repressor을 operon에서부터 떨어뜨린다. 따라서 promoter
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