바이오에탄올실험

목차

ABSTRACT Ⅰ

TABLE OF CONTENTS Ⅱ

LIST OF FIGURES Ⅲ

1. INTRODUCTION Ⅴ
　
1-1. 멸균법 Ⅴ
　
1-1-1. 화염멸균법(Flaming sterilization)-----------------------------Ⅴ

1-1-2. 건열 멸균법(Dry heat sterilization)----------------------------Ⅴ

1-1-3. 고압증기 멸균법(Autoclave)-------------------------------Ⅴ,Ⅰ

1-1-4. 자비 멸균법(Sterilization by boiling)--------------------------Ⅰ

1-2. 배지------------------------------------------------------Ⅰ,Ⅱ
　
1-2-1. 액체배지-------------------------------------------------Ⅱ

1-2-2. 고층배지,사면배지------------------------------------------Ⅱ

1-2-3. 평판배지-------------------------------------------------Ⅱ

1-3. 배양법 Ⅱ
　
1-3-1. 액체배양-------------------------------------------------Ⅱ

1-3-2. 고체배양-----------------------------------------------Ⅱ,Ⅲ

1-4. 알코올 발효------------------------------------------------Ⅲ,Ⅳ
　
2. EXPERIMENT Ⅴ,Ⅵ

3. RESULTS & DISCUSSION Ⅶ
　
3-1. RESULTS Ⅶ
　
3-2. DISCUSSION Ⅶ

4. CONCLUSION Ⅷ

REFERENCES Ⅸ

본문내용

h에 넣어둔다. Clean bench에서 작업하기 전에는 반드시 70% 알코올로 소독하고 알코올 램프를 켠다. 액체 배지는 Clean bench에 그대로 두고 고체배지는 약 60℃까지 식힌 후 petri dish 10개에 25ml~30ml씩 부어 랩으로 감싼다음 하루동안 건조시킨다.주의할 점은 petri dish 뚜껑에 습기가 생기지 않도록 잠깐 열어두어야 한다. 액체배지가 식으면 백금이를 화염멸균 시켜준 후 Yeast를 약간 묻혀 액체배지(100ml)에 넣어준다. 삼각플라스크의 입구, 면전, 호일 등을 알코올 램프로 화염멸균 해야한다. Shaking incubator에서 30℃ 24시간동안 배양시키고, 나머지 200ml 삼각플라스크는 clean bench에 보관한다.
. 실험 둘째날(화요일)에는 Steaking을 한다. 24시간동안 키운 액체배지에서 화염멸균된 백금이를 식힌 후 균을 묻혀 고체배지에 streaking 해준다. 플레이트를 뒤집어서 incubator에 넣고 30℃에서 하루이상 배양한다. 다음 실험조가 사용할 것으로 파라필름으로 이를 봉해서 냉장 보관한다.
. 실험 셋째날(수요일)에는 UV 및 당분석를 측정 한다.Clean bench에서 작업하기 위해서 70% 알코올로 소독하고, 화염멸균한 백금이로 고체배지에서 미리 배양된 균을 묻힌다. 식혀둔 액체배지에 균이 묻어있는 백금이를 담가 균이 풀어지도록 한다. sampling하여 초기값측정을 위해 UV 및 당분석을 한다. 이와 같이 준비된 배양액을 shaking incubator에서 30℃ 배양시킨다. 1시간마다 sampling을 해서 UV 및 당분석을 시행한다. 7~8시간째까지 sampling해서 시간변화에 따른 기질(당)의 농도와 미생물 증식 농도를 그래프로 그려본다.
Figure 1. 진탕배양기(Shaking incubator) Figure 2. 진탕배양기 온도
Figure 3. 고체배지 Figure 4. 화염멸균
3. RESULTS & DISCUSSION
Table 1. 액체 배지의 UV 측정
측정 시간
시간(hr)
UV 흡광도
09:00
0
0
10:00
1
0.087
11:00
2
0.091
12:00
3
0.103
13:00
4
0.114
cf. 원심분리 후 당 농도를 측정하려고 하였으나, 기기의 고장으로 인하여 측정할 수 없었다.
Fig.5. 시간에 따른 UV 측정
-> 초기값을 측정하기 위해 UV 분석 및 당분석을 한다. 매 시간마다 Sampling을 해서 UV를 측정하였다. 배양을 시작 후 시간이 증가함에 따라 UV 값 1시간 후 0.087, 2시간 후 0.091, 3시간 후 0.103, 4시간 후 0.114로 나타났다. 계속해서 측정하여도, 역시 미소하게 증가하는 양상을 보일 것이다. 당 농도를 측정하지 못하였으나, 균이 배양되는 시간이 더 많이 흐를수록 당의 농도는 줄어들 것으로 예상할 수있다.
DISCUSSION
다른 실험들에 비해서 시간이 더욱 많이 걸렸던 실험이었다. Ethanol 생성곡선은 GC(Gas Chromatography)를 통해 측정할 수 있으므로, 실험을 하면서 Ethanol의 생성정도를 알 수는 없었지만, C6H12O6 →­ 2CH3CH2OH ＋ 2CO2 반응을 통해서 에탄올이 생성된다는 것은 알 수 있었다.
UV측정을 통한 미생물이 얼마나 생성되는 지를 알 수있었지만, 당 분석기기의 고장으로 인해 당 분석을 하지는 못했다.
당과 미생물 에탄올 이 세가지를 분석하면 다음과 같다. 당이 감소함에 따라서 미생물의 양은 점점 증가하게 되고, 미생물이 급격히 증가하기 시작하는 그 순간부터 에탄올이 생성될 것으로 예측할 수 있다. UV측정도 기기가 한 대밖에 없어서 4번까지 밖에 측정을 하지 못해서 많은 아쉬움이 남았다.
자연계에 분포하고 있는 모든 종류의 세균을 순수하게 분리,배양하는 것은 불가능하지만 채취한 시료에서 세균을 가능한 고율로 분리 배양에는 그 세균의 생육환경을 고려하여 가장 적당한 분리 및 배양조건을 선택하는 것이 필요하다. Shaking incubator에서 30℃로 24시간 동안 배양을 시켰는데, 이것은 산소 공급이 필요한 통성, 호기성 미생물의 배양조건을 고려한 것임을 알 수있었다.
4. CONCLUSION
이번실험은 3일간에 걸쳐서 액체배지와 고체배지를 만들고 균을 배양함으로써 에탄올이 얼마나 생성되는지를 확인하였다.Clean bench안에서 실험을 할 때에는 균이 번식 할수도 있으므로, 70% 알코올로 소독을 하였다.이는 70% 알코올이 가장 살균효과가 좋기 때문이다. 그 후에 Shaking incubator에서 30℃ 24시간동안 배양시키는데, 진탕배양은 온도를 자동 온도 조절기로 조절하며 회전장치를 하여 일정한 속도를 유지할 수 있어서 산소의 공급이 필요한 통성, 호기성 미생물의 액체 배양에 사용한다.
실험 둘째날(화요일)에는 고체 배지에 Streaking을 하였다. Streaking 을 하는 이유는 Single Colony를 얻기 위해서다. 화염멸균된 백금이를 식힌 후에 균을 묻힌 후 Streaking을 해주었는데, 백금이를 충분히 식히지 않아서 Petri dish 안에 있던 배지 표면이 열에 녹아서 찢어졌던 것을 알 수 있었다.
UV측정 후에 원심분리를 한 다음 당 농도를 측정한다. 밀도가 다른 두 가지 이상의 성분을 원심력을 이용하여 분리하기 위해서 원심분리기를 이용하였다. 그러나 당 농도를 측정하는 기기가 고장이 나서 결과를 측정할 수 없어서 아쉬움이 남았다. UV측정 또한 기기가 한 대밖에 없는 관계로 4번 정도 측정하고 실험을 종료하게 되었다.
미생물이 성장할수록 당의 농도는 감소하게되며, 이는 미생물들이 당을 먹으면서 성장하게 됨을 뜻한다. 그리고 당이 발효를 통해 에탄올을 생성하게 된다는 것을 알게되었다.
REFERENCES
[1] 배무.이영무 , 최신 미생물학, 아카데미 서적, 1994
[2] 이갑상, 응용 미생물학, 대학 서림, 2000
[3] 서승교,이웅수 , 미생물 실험법, 보문각, 2006
[4] 이계준 ,발효 미생물학, 라이프 사이언스
[5] http://100.naver.com/100.nhn?docid=72255

키워드

바이오,   에탄올,   신재생