[분자유전학실험]3.Enhanced thermotolerance

소개글

[분자유전학실험]3.Enhanced thermotolerance에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

기능이 억제되었을 때, 제대로 접혀지지 않은 단백질 덩이에 의해 박테리아는 죽는다. 박테리아 단백질 30%가 재대로 모양을 갖추지 못하게 된다.
분자 생물학자는 이제 분자 샤페론으로써 그 역할을 하는 17개 이상의 단백질을 밝혀냈다. 많은 것들은 세포가 고열에 노출되었을 때 많이 만들어지는 heat shock 단백질이다. 고온은 단백질이 못 접히게 하여 heat shock 샤페론 단백질이 세포 단백질을 다시 접히게 해준다.
[Figure 3. 이 드럼통같이 생긴 샤페론 단백질은 heat shock protein로 고온에서 엄청난 양을 생성한다. 잘못 접힌 단백질은 한 쪽 통으로 들어가고 주형이 그 부분을 덮은 뒤 단백질을 가둔다. 분리된 단백질은 이제 제대로 접힐 기회를 가지게 된다. 짧은 시간이 흐른 뒤, 단백질은 접혔거나, 풀리면서 빠져나오고 이 과정은 계속 반복된다.]
IPTG 역할
IPTG란 유도물질이다. 억제되려는 것을 막아서 계속 발현을 하도록 만드는 물질이다. Lactose operon의 경우 promoter다음에 operator 위치에 평소에는 Repressor가 결합하고 있는 상태이다. 이 때 allolactose를 넣어주면 이것은 repressor와 결합하여 Lac operon유전자로부터 떼어내게 되고 이어 단백질 합성이 일어나는 것이다. 이 때 쓰이는 allolactose를 inducer라 하고 이와 비슷한 구조를 가지고 같은 기능을 보이는 화합물중 대표적인 것이 바로 IPTG이다. 다시 말해 IPTG는 Lac operon에서 beta-galactosidase가 만들어질 때 inducer로 사용되는 물질이다. Allolactose 대신 인공적인 화합물을 이용하는 이유는 IPTG의 경우 세포내에서 분해가 되지 않기 때문에 항상 같은 양의 발현을 유도할 수 있기 때문이다. E.coli에서 쓰이는 단백질 발현벡터 등에는 프로모터 뒤에 위 Lac operator가 있어 단백질을 발현하고자 할 때 IPTG를 넣어주어야만 충분한 양이 나오게 된다. 따라서 IPTG를 넣어주는 이유는 lac Z 유전자는 beta-galactosidase라는 효소를 코딩하는 유전자이다. 이 유전자의 발현은 그 앞에 있는 lacP(promoter)와 lacO(operator) 부위에 의해 조절을 받는다. 평상시에는 lacI(inhibitor) 유전자 산물이 lacO 부위에 결합하고 있어 promoter에 결합한 transcription machinary가 더 이상 진행할 수 없어 lacZ 유전자가 발현되지 않다가 IPTG라는 물질을 넣어주면 IPTG가 lacI product에 결합하고 따라서 lacI product를 lacO 부위에 결합하지 못하게 된다. 그러면 promoter에 결합한 transcription machinary가 앞으로 진행하면서 lacZ 유전자의 발현을 일으키게 된다. 대장균에서 단백질을 대량생산 할 때, 특히 독성이 있어 계속 만들고 있으면 대장균을 죽이는 단백질을 대량 생산할 때 많이 사용되는 방법이다.
6. Reference
미생물학 12판 (Brock biology of microorganisms) / Madigan 저 오계헌 역 / 바이오사이언스 / 2009.04.15 / p229
생명과학 / George B. johnson외 계명찬, 김애리, 전병학 역 / 동화기술 / 2007.03.10 / p60
http://blog.naver.com/ari49?Redirect=Log&logNo=14002071490
날 짜
학 번
성 명
담당 교수님
http://www.biovisualtech.com/bvplasmid/pET_11_a.htm

키워드

Enhanced,   Enhanced thermotolerance,   분자유전학실험,   생명과학