세포의관찰

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세포의관찰에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

양모 등의 염색 외에 색연필·잉크 등의 착색에 사용된다. 또는 pH1.5 부근에서 산형(酸形)의 녹색으로부터 염기형의 푸른색으로 변하므로 산염기의 지시약으로 사용된다.
배양기구
1.백금선 및 백금이
미생물의 이식 및 도말 등에 쓰인다. 선상의 백금선이 사용되나 보통은 염가의 니크롬선을 약 5cm 길이로 잘라 유리막대 또는 금속막대에 끼어 사용한다. 백금이는 니크롬선의 끝을 지름 약 2mm로 감아 만든다. 백금선과 백금이는 사용전과 후에 반드시 알코올 램프나 버어너의 화염으로 멸균한다.
2.백금선 및 백금이의 멸균법
멸균하는 법은 먼저 백금선이나 니크롬선의 부분을 빨갛게 가열하고 다음에 자루의 금속부분의 반 가까이 까지 서서히 화염 속에 넣는다. 처음에 백금선을 환원불꽃(내염)에 넣고 다음에 서서히 산화불꽃(외염)에 넣는다. 왜냐하면, 갑자기 산화불꽃에 넣으면 균체가 불꽃으로부터 튀어 주위로 날아가 공기를 오염시킬 수 있기 때문이다.
세균의 도말표본 제작법
보통 세균의 표본은 슬라이드 글라스위에 바르므로 도말표본이라 한다. 슬라이드 글라스는 사용하기 전에 지방을 완전히 제거할 필요가 있다. 슬라이드 글라스에 물을 떨어뜨려 물이 전면으로 잘 퍼지면 지방이 제거된 것이고 물방울을 형성하면 아직도 지방이 남아 있는 것이다. 지방이 충분히 제거되지 않으면 세균이 슬라이드 글라스의 표면에 고정되지 않고 흘러가 버린다. 지방이 충분히 제거되지 않은 슬라이드 글라스는 불꽃 속을 몇 번 통과시켜 지방을 태워버림으로써 제거할 수 있다.
다음은 도말표본의 제작순서이다.
1.도말
깨끗한 슬라이드 글라스를 코르넷 핀셋으로 고정하고, 피검재료가 액체인 경우에는 화염멸균한 백금이로 채취하여 유리면상에 둥글게 또 얇고 편평하게 편다. 또 피검재료가 집락과 같은 고체인 경우에는 미리 슬라이드 글라스에 멸균식염수 또는 증류수를 백금이로 한 방울 떨어뜨리고, 이 속에 미량의 피검재료를 백금이로 채취하여 얇게 바른다. 멸균백금이로 세균을 채취 할 때에는 백금이를 멸균하여 냉각한 후에 사용한다.
2.건조
도말한 표본은 그대로 공기 중에 방치하여 자연 건조시킨다. 급할 때에는 도말면을 위로하여 밑에서 약한 불로 천천히 데우면서 움직여서 건조시킨다.
3.고정
도말면을 위로 하여 버어너의 불꽃 속에서 서서히 몇 번 연속 통과시키면 균체는 그 원형질 성분이 고화되면서 유리면에 고정된다. 이 조작은 나중에 수세할 때에 균이 씻겨 내려가는 것을 방지하는 동시에 멸균 효과도 있다.
단순염색의 경우는 보통 화염 고정법을 쓰나 특별한 경우에는 메탄올, 에탄올, 포르말린, 오스뮴산 등으로 고정할 수가 있다.
4.염색
염색법은 일반적으로 도말면이 전부 덮히도록 염색액을 충분히 떨어뜨려 보통 1~2분간 방치하고 여분의 염색액은 슬라이드 글라스를 기울여 버린다. 보통 단순염색에는 메틸렌블루 염색액과 푸크신 염색액을 사용한다.
5.수세
약한 수돗물 또는 서서히 흐르는 물을 쓴다. 흐르는 물은 도말면의 뒷면에 댄다. 씻은 물이 무색으로 변할 때까지 천천히 씻는다.
6.건조
표본을 여과지 사이에 끼고, 가볍게 눌러 수분을 흡수시키고, 공기 중에서 건조시킨다. 검경전에 표본위를 커버글라스로 덮는다.
7.검경
먼저 저배율 렌즈를 써서 표본의 주요부분을 시야의 중앙에 둔다. 다음에 1000배 이상의 관찰이 필요한 세균 등은 유침해서 고배율로 본다.
○재료
광학현미경, Xylene, Immersion oil, 슬라이드글라스, 커버글라스, 크리스탈 바이올렛, 실험배지, 백금선, 알코올램프, 성냥
○실험방법
1.박테리아와 효모가 들어있는 실험배지를 준비한다.
2.실험 배지에 있는 집락을 백금선으로 채취하여 슬라이드글라스 위에 얇게 펴 바른다. 사용한 백금선은 알코올램프의 불을 이용하여 멸균한다.
3.크리스탈 바이올렛 염색약을 한 두 방울 떨어뜨린 뒤 1~2분정도 염색이 되도록 기다린다.
4.서서히 흐르는 물에 염색약을 씻는다.
5.물기를 닦은 뒤에 기포가 생기지 않게 15˚의 각도로 커버글라스를 덮어준다.
6.프레파라트를 광학현미경으로 관찰하는데 상이 흐릿하게 나올 경우 Immersion oil을 대물렌즈에 바른다. 그 뒤에 실험 끝난 후 Xylene으로 종이에 묻힌 뒤 대물렌즈를 닦아준다.
○실험결과
이번 실험에서 1번 효모는 작은 동그라미로 많이 퍼져있고, 2번 효모는 상이 흐릿해서 보지 못했다. 3번 박테리아의 경우는 큰 동그라미 모양으로 보인다. 마지막 4번은 막대모양이 퍼져있는 것처럼 보인다.
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○토의
효모가 박테리아보다 커서 x400배로 보기 때문에 쉽게 찾을 수 있었는데, 염색을 않고 물을 약간 묻혀 프레파라트로 만들어서 보니 눈에 띄는 것을 보지 못하고, 또 효모를 찾을 때 염색하지도 않았는데 광원을 강하게 하여 찾는데 어려움을 겪었다. 박테리아의 경우 효모보다 작아 x1000배로 관측해야 하기 때문에 그냥 찾기에도 힘이 든다. 거기에 우리는 염색을 한 후 물로 염색약을 씻어 낼 때 박테리아 염색부위를 잘 씻지 못해서 광학현미경으로 관찰할 때 박테리아는 찾지 못하고 염색약만 보여 더욱 찾기 힘들었고, 그 프레파라트를 보기 위해서 시간을 너무 낭비해 나중에 다른 프레파라트를 만들어서 관측하기에 시간도 부족했다. 또 x1000배에선 현미경 상이 흐릿해지기 때문에 Immersion oil을 사용하여 상을 뚜렷하게 보이게 해야 했는데 실험시간동안 Immersion oil을 사용하지 않아 어려웠다.
또 박테리아를 백금선을 사용해서 실험배지 집락을 약간 취해서 슬라이드 글라스 위에 얇게 펴 바르는 과정을 하는데 너무 조금 취해 슬라이드 글라스 위에 펴 발라서 찾는데 오래 걸리기도 했다.
효모는 진핵미생물로서 세포벽, 세포막, 핵, 사립체, 과립 등 세포 소기관을 갖추고 있는데, x400배로 관찰해서 그런지 세포 소기관은 커녕 효모 찾기도 힘들었다. 박테리아와 효모를 의 형태를 관찰 후 그 형태에 비슷한 박테리아와 효모를 찾으려 했으나 형태 맞추기도 실패했다. 그리고 박테리아의 경우 이번에도 늦게 찾아서 박테리아에서 수분이 빠져나가 제대로 된 모양의 박테리아를 관찰 할 수 없었다.
○참고문헌: 미생물학, 환경미생물학, 미생물의생물학

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세포의관찰,   박테리아,   간균 ,   구균