세포 생화학 및 실험 - PCR의 종류와 응용의 예

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세포 생화학 및 실험 - PCR의 종류와 응용의 예에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

과 (그림1)는 대부분의 original colonies (lanes 4-7)로부터 full-length HNF-4 cDNA (1.2kb)가 증폭되는 결과는 보이나 miniprep plasmid DNA (lanes 8-11)에서는 그렇지 않았다. 한편 bacterial growth가 부족한 4개의 agarose samples (lanes 12-15)에서는 full-length HNF-4 cDNA (1.2kb)가 증폭되는 예상치 못한 결과를 얻을 수 있었다.
그러므로 agar sample로부터 얻은 PCR product는 selection plate 에 spread된 transformation culture에 존재하는 미량의 insert DNA에 의한 것이라 할 수 있다.
PCR시 product가 형성되는 결과를 나타낼수 있는 최소의 양을 확인하기 위해 template인 pf7 DNA를 4000, 400, 40, 4, 0.4pg으로 희석한 다음 Npf7과 Cpf7 primer를 이용하여 PCR 증폭하였다. 결과 (그림2)에서 보여지는 바와 같이, lane6, template 0.4pg의 존재하에서도 products가 형성됨을 알 수 있다. ligation시 이용되는 insert DNA의 양 (100ng)을 고려해 볼 때 실험에 이용된 agar sample에는 대략 10pg의 insert DNA가 포함되어 있음을 추정해 볼 수 있다.
결론적으로, PCR은 bacterial plates상의 형질 전환된 culture의 일부분이 spread된 ligation reaction으로 부터 DNA를 detection하는 데 이용될 수 있다.
때문에 이때 발생되는 문제를 해결하기 위해서 vector와 insert 모두를 확인할 수 있는 primers를 이용하여 overlapping product의 형성 유무로 real transformants임을 확증하는 과정이 필요하며 무엇보다도 원치않는 DNA가 cell과 결합할 수 있는 확률, 즉 contamination의 확률을 제거할 수 있도록 주의깊은 실험이 선행되어야 할 것이다.
<참고문헌>
♠ Web site
http://www.seoulin.co.kr/e-mail/technique/980814/copcr.html
http://www.scllab.co.kr/special/human.htm
http://www.scllab.co.kr/special/bacteria.htm
http://www.seoulin.co.kr/catalog/pcr/rtpcr.html
http://www.scllab.co.kr/special/pcr/pcr12.htm
http://my.netian.com/~esnine/Proto/Proto-15.htm
♠ 참고서적
책이름 : 인간게놈프로젝트
저 자 : 로버트 쿡-디간 / 황현숙, 과학세대 옮김
출판사 : 민음사
페이지 : P92
책이름 : 동물유전공학
저 자 : 박용호, 백명기, 상병찬, 여정수, 이창수, 한재용, 황우석 공적
출판사 : 선진문화사
페이지 : P334-336

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