LAB 07: PCR(Polymerase Chain Reaction)의 원리 및 실습

소개글

LAB 07: PCR(Polymerase Chain Reaction)의 원리 및 실습에 대한 보고서 자료입니다.

목차

7R-1. 실제 PCR효율은 이론적인 것 보다 휠씬 떨어진다. 왜 PCR효율이 예상
되는 것 보다 낮아지는 지 그 이유를 설명하라.

7R-2. Reverse Transcriptase-PCR과 Real Time-PCR을 비교설명하라.

7R-3. 범죄현장에서 피가 뭍은 옷이 두 벌 발견하였다. 두 벌에 존재하는 피가 동일인 인지 아니면 서로 다른 사람인지 PCR기법으로 밝혀낼 수 있다. 어떻게 하면 쉽게 알 수 있는 지 설명해 보라.

본문내용

A중합효소, 프라이머, 뉴클레오티드 이다.
주형 DNA는 90도 이상의 열을 가하면 변성이 되어 2가닥으로 분리된다. 이 변성과정을Denaturation이라고 한다.
온도를 60도로 낮추어 분리된 DNA 양 말단 염기서열과 상보적인 프라이머가 결합한다. 온도를 낮추게 되면 분리된 두가닥의 DNA가 다시 결합하는 경향을 보이지만 짧은 가닥의 프라이머가 많은량으로 존재하게 되면 주형 DNA와의 경쟁에서 프라이머와 DNA가 결합하려는 경향이 더 강하기 때문에 이중나선 구조는 형성되지 않는다.
온도를 다시 DNA중합효소의 활성에 적합한 72도 올린다. DNA중합효소는 DNA 이중 나선중 한개의 사슬을 주형으로 하여 새로운 DNA사슬을 형성하는 촉매효소이다. 그림과 같이 위쪽의 프라이머는 왼쪽으로 이동하면서 위쪽 DNA의 상보적 DNA가닥을 만들고 아래쪽 프라이머는 오른쪽으로 이동하면서 아래쪽과 상보적 DNA가닥을 만든다.
이렇게 해서 2가닥의 이중나선구조의 DNA가 만들어 지면 다시 90도 이상 온도를 올려 변성시킨다.
변성(1분)- 결합(1분)- 신장(2분)의 사이클을 20~30회 정도 반복하면 수백만의 증폭된 DNA의 복사체를 합성 할 수가 있다.

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