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플라즈 미드, 박테리오파아지 1.DNA분자가 유전자 클로닝 운반체 역할 하기위한 특징
2.플라즈미드의 기본 특징
3.플라즈미드의 선별표식자로서 항생제 저항성의 이용
4.비삽입 플라즈미드와 에피좀의 복제전략
5.크기와 사본수
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박테리아 배양과 수확
세포가 피괴되면서 내용물 유리
DNA를 제외한 모든 성분 제거위해 세포추출물 처리
DNA 용액농축 세포전체 DNA
세포 전체 DNA의 준비
플라즈미드 DNA
플라즈미드 DNA정제
파아지 DNA
박테리오파아지 DNA제법
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:분석하고자 하는 DNA를 비교할 수 있도록 전기영동시 그 크기를 알 수 있는 DNA를 Marker 이라 한다.
② loading dye: loading dye는 크게 두 가지 기능을 지닌다. 첫째는 사용하는 물질이 잘 가라앉도록 하고, 둘째는 이 물질이 대략 어느 정도 전기영동
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: 2 ~ 2.5 volume
final 0.3 M sodium acetate, pH 5.2 :
commonly used
final 0.2 M sodium chloride
DNA containing SDS
final 2 M ammonium acetate
triphosphate removal
inhibits T4 polynucleotide kinase and TdT
final 0.8 M lithium chloride
RNA precipitation, very soluble in ethanol
inhibits rever
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미드에 존재하는 내성유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택배지에서 균주를 배양하면, 플라즈미드를 갖고 있는 형질전환 균주는 항생물질이 존재하는 배지에서 살아남는다. 이 형질전환 균주를 액체 배지상에서 적당한 세포수로 배양
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